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里來醫(yī)學(xué)銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞的“身份證”——細(xì)胞STR鑒定
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在過去的幾十年間，細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的文章一直在發(fā)表，科研成果一直在公布，然而，當(dāng)中哺乳動(dòng)物細(xì)胞被錯(cuò)誤鑒定、存在交叉污染的情況也同時(shí)存在著。 如果認(rèn)錯(cuò)了細(xì)胞系，后果可想而知： 1、浪費(fèi)時(shí)間和科研經(jīng)費(fèi)； 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可重復(fù)、科研結(jié)果不可靠； 3、會(huì)被學(xué)術(shù)期刊拒收或撤稿。 最可怕的錯(cuò)用是在瑞典某大學(xué)的一個(gè)研究組里，該研究組從1988年起就錯(cuò)誤地使用了Hela，以為是lnt-407細(xì)胞系，并因此在從1988到2011年里發(fā)表了41篇論文，全部是錯(cuò)的。這些文章發(fā)在Oncogen, JBC，Carcinogenesis,PLoS One, J Cell Physiol, Cancer Res, Br J Cancer, Biochem J, Exp Cell Res等眾多熱門雜志上。 從國內(nèi)/國外來源細(xì)胞的情況統(tǒng)計(jì)結(jié)果看，Hela細(xì)胞的絕對“攪屎棍”地位不容撼動(dòng)！除此之外，在2001年，科學(xué)家在一篇論文里報(bào)道了一株新建立的大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞系，命名為RGC-5。在隨后的十幾年時(shí)間里，至少230篇論文的研究與假設(shè)是建立在這株細(xì)胞系上。結(jié)果在2009年，序列測定結(jié)果表明，RGC-5是一株小鼠（mouse）細(xì)胞。 所以，你需要“細(xì)胞身份證明”——細(xì)胞STR鑒定 近年來，大量研究表明STR 基因分型方法是進(jìn)行細(xì)胞交叉污染和性質(zhì)鑒定的最有效和準(zhǔn)確的方法之一，STR 基因分型應(yīng)用于細(xì)胞鑒定已被ATCC等機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈推薦，美國的ATCC細(xì)胞庫、德國的DSMZ細(xì)胞庫以及日本的JCRB細(xì)胞庫等為STR 分型提供了各細(xì)胞株的數(shù)據(jù)供對比。 STR基因位點(diǎn)由長度為3~7個(gè)堿基對的短串聯(lián)重復(fù)序列組成，這些重復(fù)序列廣泛存在于人類基因組中，可作為高度多態(tài)性標(biāo)記，被稱為細(xì)胞的DNA指紋，其可通過PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）來檢測，STR基因座位上的等位基因可通過擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)重復(fù)序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分，在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測技術(shù)來識(shí)別，隨后通過一定的計(jì)算方法，即可根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與專業(yè)的細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出樣品所屬的細(xì)胞系或可能交叉污染的細(xì)胞系名稱。 截至目前，細(xì)胞系鑒定問題已有50年歷史，所謂細(xì)胞系鑒定，即通過STR（短串聯(lián)重復(fù)）圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后，細(xì)胞系可以通過定期的檢測，以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。 何時(shí)需做細(xì)胞系鑒定？ 1.發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前 2.使用細(xì)胞進(jìn)行臨床治療（試驗(yàn)）前 3.準(zhǔn)備凍存保種或已凍存多年的細(xì)胞 4.一個(gè)涉及細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí) 5.新得到的細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)室培養(yǎng)5代以上的細(xì)胞 6.細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大 如何減少細(xì)胞系交叉污染？ 1.從信譽(yù)良好的組織或機(jī)構(gòu)獲得細(xì)胞系 2.良好的文檔編制方法 3.訓(xùn)練有素的技術(shù)操作員 4.每種細(xì)胞系單獨(dú)使用培養(yǎng)基 5.溶液或試劑分裝使用 6.常規(guī)性的注意細(xì)胞系身份以及其特性是否發(fā)生污染 7.早期做好充足的凍存儲(chǔ)備 8.細(xì)胞培養(yǎng)代數(shù)不要太高 有了細(xì)胞STR鑒定，你的細(xì)胞也是有“身份”的細(xì)胞啦！而且科研成果更可靠，也不用擔(dān)心發(fā)表科研文章時(shí)的細(xì)胞鑒定問題了！ |
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