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艾柏森_LB新蟲 (初入文壇)
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【操作篇】western blot 之蛋白含量測(cè)定 已有1人參與
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WB實(shí)驗(yàn)在提取完蛋白質(zhì)后，就要對(duì)蛋白含量進(jìn)行測(cè)定 測(cè)定方法如下： 一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 1、從-20℃ 取出1 mg/ml BSA，室溫融化后，備用。 2、取18 個(gè)1.5 ml 離心管，3 個(gè)一組，分別標(biāo)記為0 μg，2.5 μg，5.0 μg ，10.0 μg，20.0 μg ，40.0 μg。 3、在各管中加入各種試劑。 4、混勻后，室溫放置 2 min。在生物分光光度計(jì)上比色分析。 二、 檢測(cè)樣品蛋白含量 1、取足量的1.5 ml 離心管，每管加入4℃ 儲(chǔ)存的考馬斯亮藍(lán)溶液1 ml。室溫放置30 min 后即可用于測(cè)蛋白。 2、取一管考馬斯亮藍(lán)加0.15mol/L NaCl 溶液100 μl，混勻放置2分鐘可做為空白樣品，將空白倒入比色杯中在做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的程序下按blank 測(cè)空白樣品。 3、棄空白樣品，用無水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5 ml），再用無菌水洗一次。 4、取一管考馬斯亮藍(lán)加95 μl 0.15mol/L NaCl溶液和5μl待測(cè)蛋白樣品，混勻后靜置2 min，倒入扣干的比色杯中按sample鍵測(cè)樣品。 注意：每測(cè)一個(gè)樣品都要將比色杯用無水乙醇洗2次，無菌水洗一次�？赏瑫r(shí)混合好多個(gè)樣品再一起測(cè)，這樣對(duì)測(cè)定大量的蛋白樣品可節(jié)省很多時(shí)間。測(cè)得的結(jié)果是5 μl樣品含的蛋白量。 |
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2樓2023-09-01 11:20:02
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