 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 746 | 回復(fù): 0 | |||
2280ke銅蟲 (小有名氣)
|
[交流]
動物實驗日常操作：小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞元代分離
|
|
BMSCs來源方便，易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和純化，多次傳代擴(kuò)增后仍具有干細(xì)胞特性，免疫原性低。但是不同的分離培養(yǎng)方法使得BMSCs在體外擴(kuò)增時的純度、活性、表型和分化潛能差異很大，導(dǎo)致基礎(chǔ)研究結(jié)論各異和臨床試驗效果不一。因此，深入認(rèn)識BMSCs不同分離方法和培養(yǎng)條件的優(yōu)缺點，并根據(jù)實驗?zāi)康淖龀鱿鄳?yīng)選擇，是進(jìn)行BMSCs實驗研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 目前用于分離BMSCs的方法主要有五種，分別是貼壁篩選法、骨組織消化法、密度梯度離心法、流式細(xì)胞儀分離法和磁珠分選法。 下面向大家詳細(xì)介紹貼壁篩選法，對初次培養(yǎng)者來說，貼壁法分離BMSCs操作簡單易掌握，不易發(fā)生污染，是一個較好的分離方法。不足的是分離提取的細(xì)胞純度相對不高。 ✦ 貼壁篩選法 ✦ 貼壁篩選法是利用細(xì)胞貼壁時間及貼壁牢固性的不同，逐步將非貼壁細(xì)胞和其它雜質(zhì)細(xì)胞去除的一種簡單易行的方法，常用于干細(xì)胞的培養(yǎng)中，因此用于分離BMSCs最為廣泛。 利用BMSCs貼壁生長特性，更換培養(yǎng)液逐步去除漂浮生長的造血系統(tǒng)細(xì)胞即可獲得較純化的BMSCs；而且骨髓中的造血干細(xì)胞能分泌生長因子和促貼壁物質(zhì),可促進(jìn)BMSCs貼壁生長，貼壁篩選法也常被稱為直接培養(yǎng)法或者全骨髓法。 操作步驟 01 以頸椎脫臼法處死SPF級3-4周齡C57BL/6J小鼠或者SD/Wistar大鼠，用75%乙醇浸泡。 02 隨后在鼠的腿的位置剪開外皮和內(nèi)皮，無菌狀態(tài)下取出雙側(cè)股骨和脛骨，浸泡于無菌含雙抗PBS溶液中。剔除股骨和脛骨周圍的肌肉、結(jié)締組織，用含雙抗的PBS溶液清洗三遍。 03 用眼科剪剪去股骨和脛骨的兩端，暴露骨髓腔。 04 用注射器以完全培養(yǎng)基反復(fù)沖洗骨髓腔直至骨頭發(fā)白。 05 收集骨髓液，離心，后加入適當(dāng)培養(yǎng)基（含20%血清）接種于培養(yǎng)基皿中置于37℃，5％ CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 06 24-48h后去懸浮，接下來的每3天換液一次，直到需要傳代。 延伸閱讀 ✦ 骨組織消化法 ✦ 骨組織消化法操作簡單、成本低，且獲得的BMSCs純度較貼壁篩選法高，是分離BMSCs較為常用的方法。 操作步驟 01 參照貼壁篩選法上述操作步驟第1-3步，收集沖去骨髓的股/脛骨于無菌的培養(yǎng)皿中，用無菌眼科剪小心地將骨組織剪成約1～3mm3的碎片。 02 之后加入適量含1mg/mL Ⅱ型膠原酶的新鮮完全培養(yǎng)基（含5% FBS），于37℃搖床中振蕩消化 。 03 消化結(jié)束后離心，棄上清液，用PBS清洗兩次，然后將骨碎片接種于培養(yǎng)皿中，加入適量新鮮的完全培養(yǎng)基（含20% FBS）淹沒骨碎片，并置于37℃ 5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 04 培養(yǎng)至72h后進(jìn)行首次半量換液。此后每3天換一次液。待貼壁細(xì)胞達(dá)到80%~90%融合，進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增傳代。 使用骨組織消化法分離BMSCs也并非完美，II型膠原酶的消化可能影響B(tài)MSCs活性及增殖能力。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
可以準(zhǔn)確的通過filecode判斷基金中還是不中。
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
感覺普通人已經(jīng)沒辦法玩了，躺平是唯一的出路。
已經(jīng)有26人回復(fù)
-
植物學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有57人回復(fù)
-
江蘇省優(yōu)青門檻
已經(jīng)有20人回復(fù)
-
心好累。今年我們部門提交了18個項目。中了11了，可惜我的又掛了
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
面上項目計劃書
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
面上項目計劃書附件
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
面上項目計劃書系統(tǒng)狀態(tài)
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
NSFC-UNEP（與聯(lián)合國環(huán)境規(guī)劃署）合作項目
已經(jīng)有33人回復(fù)
-
和伊朗人合作
已經(jīng)有32人回復(fù)
-
江蘇省自然基金
已經(jīng)有6人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 2280ke 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報考 +8 | pin8023 2026-02-28 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 0703 總分319求調(diào)劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 中國林科院林化所（南京）2026年招收化學(xué)/材料/環(huán)境工程等背景碩士研究生3名 +3 | realstar2006 2026-02-27 | 3/150 |
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 人間唯你是清歡 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 成績276，專業(yè)代碼0856求調(diào)劑 +7 | 小陳朵 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料類考研調(diào)劑 +6 | gemmgemm 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +6 | wyyyqx 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研復(fù)試調(diào)劑，過國家線的同學(xué)都可報名 +7 | 黑！在干嘛 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑材料學(xué)碩 +4 | 詞凝Y 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854復(fù)試調(diào)劑 276 +5 | wmm9 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑285 +11 | 呂仔龍 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)，材料，環(huán)境類求調(diào)劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南理工大學(xué)材料與化工326分，求調(diào)劑 +3 | wujinrui1 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856化工專碩求調(diào)劑 +15 | 董boxing 2026-03-01 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 13853210211 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料學(xué)調(diào)劑 +10 | 提神豆沙包 2026-02-28 | 12/600 |
|
|
|
[基金申請]
剛錄用，沒有期刊號，但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
 10+3
|
arang1 2026-03-01 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +6 | 亭亭亭01 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑 +3 | 簡木ChuFront 2026-02-28 | 3/150 |
|