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吉田bio銅蟲 (小有名氣)
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甲型肝炎病毒動物模型
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甲型肝炎病毒動物模型 (一)甲型肝炎病毒樹鼩模型 【造模機制】甲型肝炎主要經(jīng)糞口途徑(消化道)傳播其他途徑有血液傳播、垂直傳播等。被甲肝病人大便污染的水、食物等,未經(jīng)徹底消毒被人飲用或食用很容易引起甲肝的發(fā)流行。 【造模方法】甲肝病人甲肝抗原陽性大便，制成5%懸液，并依次以3000r/min及8000r/min各離心30分鐘，上清凍存于-80℃。每只動物口服 5%甲肝病人甲肝抗原陽性新鮮大便懸液0.5ml，相當(dāng)于0.025g大便，對照組動物服同量正常人大便懸液。 【模型特點】于感染后7~13天的糞便提取物可測得甲肝抗原，持續(xù)排毒15~21天，放免法(RIA)滴度為1:10~1:32030天后排毒停止。對照組動物均未測出甲肝抗原;用第一代感染樹鼩甲肝抗原陽性糞便制備的10%懸液給每只正常樹鼩口服1ml進(jìn)行第二代感染;感染后約一周仍能在其糞便中查到抗原，排毒持續(xù)12~27天，其高峰在7~13天;第二代感染動物排毒高峰期糞便的10%懸液，以同法進(jìn)行第三代感染，后者糞便中也能查到抗原。 樹鼩感染甲肝病毒后肝功能的改變及其與糞便排毒的關(guān)系:動物于感染前一周和感染后隔周一次從心臟采血，當(dāng)天測定其血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)活性,第一代感染動物只有1/9于感染后4周出現(xiàn)SGPT升高，無其他癥狀;第二代有1/2于感染后4~6周出現(xiàn)SGPT升高，2周內(nèi)降到正常，動物食欲明顯減退，持續(xù)二個月后才恢復(fù);第三代有2/3于感染后2周出現(xiàn)SGPT 升高，2周后下降，無其他癥狀。觀察了第一代和第二代樹鼩血清轉(zhuǎn)氨酶的改變和糞便中排毒的關(guān)系，看到其排毒高峰均在SGPT升高前9~18天SGPT升高時排毒量已減少或終止。甲肝病毒感染后，樹鼩在感染后6~16周相繼死亡，病理檢查發(fā)現(xiàn)其肝臟呈不同程度的充血、水腫，以及顆粒和脂肪性變，庫普弗細(xì)胞增生，偶有小的肝實質(zhì)細(xì)胞壞死點。甲肝病毒感染后，樹鼩在感染后6~16周相繼死亡，病理檢查發(fā)現(xiàn)其肝臟呈不同程度的充血、水腫，以及顆粒和脂肪性變，庫普弗細(xì)胞增生，偶有小的肝實質(zhì)細(xì)胞壞死點。 【注意事項】從事病毒性肝炎的研究和動物模型的建立時，對實驗室和人員防護(hù)有一定的要求。根據(jù)《病原微生物生物實驗室生物安全管理條例》中的有關(guān)規(guī)定，人間傳播的微生物名錄中規(guī)定:肝炎病毒(甲、乙、丙、丁、戊型)屬于三類，應(yīng)在ABSL-2實驗室進(jìn)行。個人防護(hù)要求:口罩帽子、乳膠手套等。 【應(yīng)用范圍】 1.甲肝病毒可在樹鼩體內(nèi)繁殖，感染后7~13天開始從糞便排毒;持續(xù)15~21天,隨著病毒在樹鼩體內(nèi)傳代,潛伏期似有縮短,感染率也趨于增高;多數(shù)動物為非臨床型,第一代感染動物僅個別有一過性SGPT升高，似與病毒的適應(yīng)性有關(guān)。 2.感染后2~16周，有78%的實驗組動物血清中出現(xiàn)甲肝病毒抗體，然其滴度較低，且有的很快不能再現(xiàn),對照組的動物，服正常人大便濾液之前后,持續(xù)測出較高滴度的甲肝病毒抗體，則可能是自然感染所致,因樹鼩有吃人糞的習(xí)性，當(dāng)?shù)厝朔Q其為“屎鼠”。 3.用固相放射免疫阻抑試驗及免疫電鏡觀察病毒顆粒的大小，形狀和免疫學(xué)性質(zhì)，均證明從感染樹鼩糞便提取的抗原與人的甲肝病毒相似。 4.感染樹鼩尸檢看到其肝臟充血、水腫及實質(zhì)變性;但和國內(nèi)外用甲肝病毒感染狨猴、黑猩猩和紅面猴比較,樹鼩肝臟病變較輕,沒有出現(xiàn)急性肝炎的典型改變，這可能和病毒的感染量、毒力及其在樹鼩體內(nèi)的繁殖程度有關(guān)。 【模型評估】以人甲肝抗體包被聚苯乙烯管,加不同稀釋度受染動物糞便抗原，置37C孵育6小時后洗掉,加4個免疫粘連血凝(IAHA)單位的甲肝病人恢復(fù)期血清封閉(37℃ 2小時后洗掉)后，加125I-HAAb01ml置37C16~18小時后洗掉，用r計數(shù)器計算，與對照組抗原相比抑制計數(shù)50%以上者為陽性。第1代或第2代樹鼩糞便抗原，均能被已知人的甲肝病毒抗體所抑制,說明樹鼩糞便抗原與人的甲肝病毒有關(guān)，測定5份甲肝住院病人雙份血清的甲肝病毒抗體，結(jié)果看到，無論用甲肝病人大便抗原或從樹鼩糞便分離的抗原測定，病人恢復(fù)期血清中的抗體滴度均比急性期有4倍以上升高，進(jìn)一步證明樹鼩糞便抗原與人的甲肝病毒有關(guān)。 |
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