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LS-Cui新蟲(chóng) (初入文壇)
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人偏肺病毒的可視化檢測(cè) 已有1人參與
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人偏肺病毒(hMPV) 是 2001 年在荷蘭發(fā)現(xiàn)的一種副黏病毒，是社區(qū)獲得性呼吸道感染較為常見(jiàn)的一種病原體，特別是嬰幼兒、老年人和免疫功能受損患者中急性呼吸道感染的重要病原體。hMPV感染會(huì)導(dǎo)致上呼吸道或(和)下呼吸道感染。以陜西科技大學(xué)錢衛(wèi)東教授牽頭的研究團(tuán)隊(duì)在國(guó)際期刊《Virus Research》（病毒研究，2022年IF：6.286）雜志上發(fā)表了一篇，基于RAPID平臺(tái)與CRISPR-Cas12a結(jié)合的核酸快檢技術(shù)，應(yīng)用于人偏肺病毒的可視化檢測(cè)的文章。 該研究結(jié)合了重組酶和聚合酶等溫檢測(cè) (RAPID)技術(shù)的強(qiáng)大擴(kuò)增能力，以及Cas12蛋白質(zhì)高特異及反式切割活性，并分別結(jié)合熒光檢測(cè)與層析試紙條，開(kāi)發(fā)出了可用便攜式熒光檢測(cè)儀或者可目視化觀察檢測(cè)結(jié)果的新技術(shù)，該技術(shù)使用更加方便快捷，未來(lái)可應(yīng)用于機(jī)場(chǎng)、社區(qū)、學(xué)校、家庭等場(chǎng)所，進(jìn)一步拓寬了該檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用場(chǎng)景。近年來(lái)，基于CRISPR-Cas體系的快速檢測(cè)方法已開(kāi)發(fā)出來(lái)并應(yīng)用于各種病原體，如SARS-CoV-2、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、非洲豬瘟病毒、植物RNA病毒、食源性致病菌等。CRISPR-Cas12a體系用于檢測(cè)人偏肺病毒的應(yīng)用尚未建立。因此，陜西科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)了一種RAPID/CRISPR-Cas12技術(shù)體系檢測(cè)技術(shù)，該體系診斷人偏肺病毒N基因具有極高的敏感性和特異性。檢測(cè)用時(shí)短，試劑成本低，儀器使用簡(jiǎn)單，在臨床檢測(cè)方面具有顯著的優(yōu)勢(shì)。本研究構(gòu)建的兩種方法，熒光檢測(cè)和層析試紙條法分別可在35分鐘或者45分鐘完成。靈敏度可達(dá)6.97×102拷貝/ml，不會(huì)與其他呼吸道病原體，如人博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒發(fā)生交叉反應(yīng)�？傮w而言，重組酶聚合酶等溫?cái)U(kuò)增和 Cas12a檢測(cè)的復(fù)合體系是可靠和快速檢測(cè) hMPV的替代工具，特別適用于條件有限的資源匱乏地區(qū)。 原文鏈接：https://doi.org/10.1016/j.virusres.2021.198568 偏肺病毒的起源 人偏肺病毒是感染人呼吸道的一種臨床上較為多見(jiàn)的病原體。2001年首次在荷蘭一名兒童患者鼻咽分泌物中發(fā)現(xiàn)。這種病毒是單股負(fù)鏈RNA目，屬于副粘病毒科肺病毒亞科。當(dāng)時(shí)由于這種新病毒與偏肺病毒屬中的禽類肺炎病毒核苷酸序列有較高的同源性，于是被稱為人偏肺病毒，后在2019年被國(guó)際病毒分類委員會(huì)正式命名為人偏肺病毒。 人偏肺病毒的流行病學(xué)特性 人偏肺病毒全年均可發(fā)病，流行季節(jié)多在晚冬、春季和夏季早期。近年來(lái)由于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)的提高，臨床偏肺病毒的檢出率大幅度提升。有學(xué)者研究成果顯示人偏肺病毒是兒科呼吸道疾病中僅次于呼吸道合胞病毒的第二位致病病因，在兒科呼吸道疾病中起著非常重要的作用。此外由于各國(guó)各地地域壞境條件，檢測(cè)方法等的不同以及不同地區(qū)人群免疫狀況有所差別，造成偏肺病毒的感染率在世界各國(guó)都存在顯著差異。 人偏肺病毒感染的臨床癥狀 偏肺病毒的感染好發(fā)于嬰幼兒，癥狀嚴(yán)重程度可不一樣，有的患兒只有輕微的上呼吸道感染癥狀，但有的會(huì)造成嚴(yán)重的支氣管炎和肺炎，另外有少數(shù)患兒也可以沒(méi)什么臨床癥狀。最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)有咳嗽，肺濕啰音，發(fā)熱，喘息，鼻塞流鼻涕，氣促等。 傳播途徑和潛伏期 病毒可經(jīng)由直接或間接接觸而傳播。人類偏肺病毒感染多透過(guò)以下途徑接觸患者而傳播：咳嗽和打噴嚏的分泌物；密切接觸如觸摸或握手；和接觸那些受病毒污染的物件或表面，然后觸摸口、鼻或眼睛。潛伏期一般為3~6天。 人偏肺病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 檢測(cè)人偏肺病毒感染的方法有三種，它們是分離培養(yǎng)、血清學(xué)檢測(cè)以及核酸檢測(cè)。 根據(jù)文獻(xiàn)分析，在諸多的hMPV檢測(cè)方法中，病毒培養(yǎng)是hMPV檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)；但hMPV生長(zhǎng)緩慢，分離陽(yáng)性率偏低，更多是用于實(shí)驗(yàn)研究及藥敏試驗(yàn)等。 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）雖不適用于臨床早期診斷，但對(duì)于回顧性調(diào)查hMPV原發(fā)感染和再感染具有重要意義。 由于 hMPV在細(xì)胞中生長(zhǎng)緩慢，臨床檢測(cè)主要采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)方法。hMPV N基因在核酸序列和氨基酸序列都是最保守的(分別為 91. 2% 和 98. 4%)，常用于 hMPV 檢測(cè),G 基因是差異最大的(分別為 79% 和 59. 2%)，可用于分型，通過(guò) real time RT-PCR擴(kuò)增hMPV 這兩個(gè)基因，進(jìn)行測(cè)序就可以鑒別診斷出hMPV的四種亞型。另有研究顯示僅檢測(cè)N基因也能鑒定出aMPV和hMPV所有亞型，PCR方法具有較高的特異性和靈敏度，但是需要專業(yè)的技術(shù)人員、貴重的儀器以及專門的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地。 近年來(lái)興起的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)是一種有望替代PCＲ的新型核酸擴(kuò)增技術(shù)，其主要基于重組酶聚合酶介導(dǎo)的擴(kuò)增原理，體外模擬生物體內(nèi) DNA 復(fù)制，在恒溫條件下即可對(duì)目的片段實(shí)施擴(kuò)增，尤其適用于各種病原體的快速檢測(cè)。相較于傳統(tǒng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)而言，重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)具有反應(yīng)溫度恒定、擴(kuò)增速度快、檢測(cè)成本低、使用儀器簡(jiǎn)單以及結(jié)果可靠等優(yōu)勢(shì)，尤其適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，對(duì)急需診斷結(jié)果的患者而言意義十分重大。重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)在 hMPV 快速診斷中的應(yīng)用價(jià)值較高，可獲得較為理想的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確度，有望成為替代傳統(tǒng)PCＲ的有效檢測(cè)方式，值得臨床推廣應(yīng)用。 RAPID技術(shù)平臺(tái)可用于hMPV的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，為hMPV的防控檢測(cè)提供一種新的、可靠的技術(shù)支持。 |
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學(xué)員qhVMrx
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2樓2024-04-16 09:44:15
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