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2280ke銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
病理染色、蛋白條帶別慌張，幫你一起解決那些常見的小困惑
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近來，病理和蛋白粉絲呼聲較高，今天小助手又總結(jié)了一期關(guān)于病理、蛋白的實(shí)驗(yàn)問題，幫助大家有效解決那些在實(shí)驗(yàn)中遇到的小困惑。 做完病理如何看病變區(qū)別？ 閱片分析看組織結(jié)構(gòu)的變化、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化。 怎么判定結(jié)果好壞？ 通過閱片分析，病理變化符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡慕Y(jié)果即為滿意。 組化實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)？ 1）烤片要充分 2）脫蠟要徹底 3）修復(fù)要到位 4）抗體盡量選擇效果好的，抗體稀釋比例要合理 原位雜交需要注意什么？ 1）所有試劑都要用滅菌的DEPC·H₂O配 2）配試劑用到的量筒需要180℃烘6小時(shí) 3）加探針后一定要放在65度48小時(shí) 4）原位雜交第二天，不再需要用DEPC·H₂O配制試劑 病理染色分為哪幾個(gè)，各過程有什么區(qū)別？ HE、免疫組化、TTC染色、masson染色、鬼筆環(huán)肽染色。 為什么病理報(bào)告要等那么久？ 1）首先要取材，20只小鼠大概需要6-8小時(shí) 2）根據(jù)組織固定，如果組織比較小的話固定液充分至少需要12小時(shí) 3）軟軟的組織是不利于切片的，需要脫水大約需要18個(gè)小時(shí) 4）之后包埋，制作成蠟塊，然后才是我們熟悉的切片，將蠟塊切成4微米左右的組織白片，進(jìn)行脫臘水化 5）之后進(jìn)行染色才能在顯微鏡底下觀看，如果是HE染色一架切片30張染色過程大約需要45分鐘 6）免疫組化的話，大約需要兩天，染色完成后還需要拍片觀察。 7）最后才是技術(shù)人員簽字，這樣完整的病理報(bào)告就誕生了。 條帶上出現(xiàn)不均勻的白色斑點(diǎn)時(shí)，是什么原因？如何解決？ 原因：轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡，或膜上抗體分布不均勻 解決辦法：轉(zhuǎn)膜前小心去除氣泡，抗體孵育時(shí)保持搖動(dòng) 21kd蛋白顯出來霧蒙蒙一片，maker都看不到怎么辦？ 控制好電泳溫度（4℃），濃縮膠電泳階段延長時(shí)長，分離膠電泳時(shí)間縮短。 跑出來的分子量比說明書的分子量小三十左右是為什么？ 可能是同一基因不同的剪接mRNA的翻譯產(chǎn)物；也可能是目的蛋白有前體和成熟體，二者相差大約30Kd； 有些蛋白表達(dá)量很低，用30ug根本測不出來怎么辦？ 加大上樣量，但是雜帶會(huì)比較多，可以做個(gè)富集試試 |
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