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BASKcro新蟲 (初入文壇)
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動(dòng)物造模:小鼠心肌梗塞模型
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心肌梗死是一種嚴(yán)重的心血管疾病，由于冠狀動(dòng)脈血供急劇減少或中斷，使心肌持續(xù)性缺血缺氧以致壞死，損害心功能且可能導(dǎo)致心律失常、休克以及心力衰竭等嚴(yán)重后果，已成為威脅人類生命健康的重大疾病之一。 近幾十年來，隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步，再灌注心肌治療可顯著改善心�；颊叩纳媛剩捎谛墓０l(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過程極其復(fù)雜，使其在臨床治療中仍然面臨許多挑戰(zhàn) ，因此構(gòu)建合適的動(dòng)物模型對(duì)探究人心肌梗死的發(fā)病機(jī)制和病理過程、評(píng)價(jià)藥物療效以及探索新的治療方法至關(guān)重要。通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈模擬心肌缺血過程來建立心肌梗死的動(dòng)物模型是目前廣泛應(yīng)用的較為成熟的方法。 建模方法 術(shù)前準(zhǔn)備： 實(shí)驗(yàn)小鼠術(shù)前禁食 12 h。將小鼠放進(jìn)麻醉機(jī)的誘導(dǎo)箱，開啟氧氣調(diào)節(jié)氣流量 (0.25 MPa，1 L/min)，調(diào)整麻醉藥（異氟烷）濃度為 5%，約 1 min 完成小鼠誘導(dǎo)麻醉，之后調(diào)整麻醉藥濃度至 2%，連接小鼠面罩并持續(xù)吸入。 手術(shù)操作： 小鼠仰臥位固定，左胸前手術(shù)區(qū)域剔除鼠毛并消毒。距胸骨左緣約 1~2 mm 皮膚處做長約 1.5cm縱向切口，切口處行垂直外翻褥式縫合預(yù)留縫線。逐層鈍性分離胸壁肌肉，從第 3 或第 4 肋間隙快速進(jìn)入胸腔，用止血鉗撐開肋間隙，配合心臟跳動(dòng)左手輕輕擠壓使心臟從孔隙中彈出。在左心耳下緣1~2 mm、肺動(dòng)脈圓錐旁 0.5 mm 處以 8-0 帶線縫合針穿過冠狀動(dòng)脈前降支將其結(jié)扎，松緊適宜，控制進(jìn)針深度（以隱約可見細(xì)針為宜）和行針寬度（2 mm左右）。由于不借助通氣裝置，要求開胸時(shí)間不要超過 30 s，結(jié)扎操作盡量控制在 10 s 左右完成。結(jié)扎完成后輕柔地將心臟送回胸腔，擠壓胸腔排出空氣同時(shí)收緊結(jié)扎切口處預(yù)留縫線，完成手術(shù)。術(shù)中逐步調(diào)整麻藥濃度至零，取下面罩后將小鼠置于恒溫墊上約 3~5 min 即可復(fù)蘇。 一定要注意的操作要點(diǎn)： 快：短時(shí)間內(nèi)完成冠脈結(jié)扎術(shù)，盡快完成冠脈結(jié)扎并閉合胸壁，降低長時(shí)間暴露胸腔可能導(dǎo)致心律失常、氣胸等致死風(fēng)險(xiǎn)。 準(zhǔn)：冠脈結(jié)扎位置的選擇至關(guān)重要，由于小鼠血管細(xì)小，側(cè)枝循環(huán)豐富且走行不易觀察，因此要求實(shí)驗(yàn)者操作精確，既要保證能夠引起足夠面積的心肌梗死，又要避免梗死面積過大而導(dǎo)致死亡，盡量在同一高度結(jié)扎形成較為一致的模型； 穩(wěn)：小鼠心室壁較薄，操作者需要嚴(yán)格控制穿刺深度，避免穿刺過深直接刺破室壁造成大出血。 心電圖導(dǎo)聯(lián)： 小鼠異氟烷吸入麻醉后，仰臥固定，連接心臟導(dǎo)聯(lián)線，待基線平穩(wěn)后，記錄 4~5 個(gè)心動(dòng)周期。實(shí)驗(yàn)中我們主要使用 II 導(dǎo)聯(lián)觀察心臟前下壁心梗發(fā)生的情況，與冠狀動(dòng)脈左前降支所供給的心肌區(qū)域相吻合。心電圖導(dǎo)聯(lián)的選擇可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行調(diào)整。 造模評(píng)價(jià) 首先，在術(shù)后立刻對(duì)模型鼠施行心電圖檢查有助于幫助我們判斷冠脈結(jié)扎的初期效果，以及發(fā)現(xiàn)潛在的心律異常改變。 其次，考慮到心肌梗死特異性標(biāo)志物之一——肌鈣蛋白 (cTn)，一般在心肌壞死后 3～4 h 開始升高，我們又選擇術(shù)后 4 h 的心電圖檢查，再次對(duì)模型小鼠心梗發(fā)生情況進(jìn)行判斷，同時(shí)，排除由于手術(shù)對(duì)心臟刺激可能造成的假陽性結(jié)果，并利用術(shù)后 24 hTTC 病理染色來驗(yàn)證心電圖評(píng)估心梗發(fā)生的準(zhǔn)確情況。 心電圖評(píng)價(jià)心梗發(fā)生的準(zhǔn)確性較高，且具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果獲取迅速、不受場(chǎng)地時(shí)間限制、經(jīng)濟(jì)成本低等特點(diǎn)，故而在模型制備結(jié)果的評(píng)價(jià)中應(yīng)用較為廣泛。 總結(jié) 目前建立心肌梗死動(dòng)物模型的方法有多種，包括：冠脈結(jié)扎法、藥物法、球囊堵閉法、栓塞法以及血栓形成法等。冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法操作簡(jiǎn)單、血管阻塞明確，比較符合心梗發(fā)生的病理過程，能較好的實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化。 建立疾病的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型常常是研究工作至關(guān)重要的一步，需要考慮多方面的因素，使疾病本身特征和研究目的與所建立的動(dòng)物模型達(dá)到盡可能地一致。目前心梗治療研究不斷深入，基于心肌細(xì)胞不可再生的特性，移植治療、干細(xì)胞治療、基因治療等多種治療手段及相關(guān)機(jī)制研究成為心梗治療方案的新方向，建立一種穩(wěn)定性強(qiáng)、成功率高的小鼠心梗模型是非常必要的。 |
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