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zhby887061銅蟲 (初入文壇)
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常用腫瘤動(dòng)物模型的構(gòu)建
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從腫瘤起源分，腫瘤動(dòng)物模型的分類如下： 從研究目的來分，可以從增殖、轉(zhuǎn)移、耐藥來分析： 1、研究腫瘤細(xì)胞增殖 細(xì)胞準(zhǔn)備：GeneA敲減慢病毒感染細(xì)胞擴(kuò)增至需要的細(xì)胞量。分為：空白對照組、陰性對照組、實(shí)驗(yàn)組。 取Balb/c裸鼠，雄性，6周齡，每組10只，適應(yīng)一周后進(jìn)行腫瘤細(xì)胞注射。 XXX細(xì)胞消化離心后制成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后取適量的細(xì)胞用PBS懸浮，在Balb/c裸鼠側(cè)腹部皮下接種。 每只接種2×106個(gè)細(xì)胞，注射體積為100 μL。 此后，每隔5天測量注射部位腫瘤的體積。 30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg戊巴比妥鈉，小鼠麻醉后置藍(lán)色背景布上拍照（側(cè)臥位，接種部位朝上），小鼠頸椎脫臼處死，取出腫瘤稱重，將腫瘤置藍(lán)色背景布上拍照，腫瘤一分為二，一份4%多聚甲醛固定，待后續(xù)病理分析，一份-80℃凍存。 2、研究腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移 腫瘤轉(zhuǎn)移的模型包括兩大類：體外(浸潤模型)和體內(nèi)(轉(zhuǎn)移模型)。體外(浸潤模型)：了解腫瘤細(xì)胞對周圍相連組織的侵潤性。體內(nèi)模型主要研究腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性即腫瘤細(xì)胞在遠(yuǎn)端組織形成病灶的能力。 2.1. 體外(浸潤模型) 例：浸潤型腦膠質(zhì)瘤動(dòng)物模型的建立 方法： 取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，將分離和鑒定并轉(zhuǎn)染攜帶綠色熒光蛋白的腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞立體定向法行小鼠顱內(nèi)接種，每組10只。 小鼠麻醉后頭部正中切口，剝離骨膜后鉆孔(坐標(biāo)是冠狀縫后0.5 cm，矢狀縫右側(cè)2.5 cm) 。 取2 μL膠質(zhì)瘤干細(xì)胞以1×104 cells /只小鼠的劑量，經(jīng)微量注射器緩慢注射入鼠腦紋狀體內(nèi)(深度是2.5 ～3 mm) 。 在確定的時(shí)間點(diǎn)處死一部分動(dòng)物進(jìn)行熒光( 立體熒光顯微鏡下) 病理證實(shí)和比較，同時(shí)檢查腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的體內(nèi)生長特征以及干細(xì)胞標(biāo)志物等。 2.2. 體內(nèi)(轉(zhuǎn)移模型) 例：肩胛部皮下接種的方法建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型，目的：觀察壯骨鎮(zhèn)痛膠囊對裸鼠乳腺癌移植瘤模型骨轉(zhuǎn)移相關(guān)指標(biāo)整聯(lián)蛋白αvβ3（ITG-αvβ3）及骨唾液酸蛋白（BSP）表達(dá)的影響。 方法： 取處于對數(shù)生長期的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，用0.25%胰蛋白酶消化制成單細(xì)胞懸液，收集細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)板法計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/mL，按0.2 mL/只接種于裸鼠右前肢肩胛上區(qū)，接種部位可以見一皮丘，質(zhì)軟，2 天后，皮丘基本吸收，10 天后接種部位可觸及米粒大結(jié)節(jié)，質(zhì)硬，即乳腺癌移植瘤組織。檢測壯骨鎮(zhèn)痛膠囊對移植瘤組織中IGT-αvβ3和BSP表達(dá)的影響。 例：原位移植建立人腎透明細(xì)胞腺癌裸鼠轉(zhuǎn)移模型，觀察腫瘤病理學(xué)特征。 方法： 收集體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期786-0細(xì)胞（人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞），進(jìn)行裸鼠皮下注射，待皮下移植瘤長至直徑為1.5cm左右時(shí)取出，以相同方法進(jìn)行鼠間傳代（每代2只），3～4代后取出移植瘤，剪成1mm3大小進(jìn)行腎包膜下原位接種，獲人腫瘤裸鼠轉(zhuǎn)移模型，即外科原位移植（Surgical Orthotopic Implantation，SOI）模型，裸鼠垂死時(shí)脫頸處死，取出肺臟轉(zhuǎn)移灶體外培養(yǎng)，胰酶消化傳代4～5次后即獲得較純的腫瘤細(xì)胞，命名為786-0-LM1。同時(shí)采用786-0細(xì)胞懸液進(jìn)行腎包膜下原位注射，建立細(xì)胞原位注射模型。 3、研究腫瘤細(xì)胞耐藥 3.1. 耐藥細(xì)胞株的建立 本實(shí)驗(yàn)以紫杉醇為誘導(dǎo)藥，以人食管鱗癌細(xì)胞系 EC109為誘導(dǎo)對象，采用高劑量間歇誘導(dǎo)結(jié)合時(shí)間遞增的方法建立耐藥細(xì)胞株。 終濃度為0.625 μg/ml 的紫杉醇（此濃度是紫杉醇對 EC109 細(xì)胞 IC50 的 12.5 倍）作用于對數(shù)生長期的EC109 兩個(gè)小時(shí)，之后棄含藥培養(yǎng)基，用 4℃PBS 洗三次，0.25%胰蛋白酶消化處理，800r/min 離心 4min 收集細(xì)胞，加培養(yǎng)基重懸，重新接種于培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)； 24 小時(shí)后可見大量細(xì)胞死亡，不斷去除凋亡細(xì)胞，擴(kuò)增活細(xì)胞，至生長狀態(tài)良好，達(dá)到 70%~80%飽和時(shí)，傳代培養(yǎng) 3 代； 重復(fù)上述操作兩次，即 EC109細(xì)胞在此階段共被藥物作用 3 次，得到細(xì)胞 EC109/Taxol。 MTT 實(shí)驗(yàn)測定親本細(xì)胞與耐藥細(xì)胞對多種細(xì)胞毒類化合物的敏感性。 3.2. 裸鼠移植瘤耐藥模型的建立 |
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