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MSC細(xì)胞成骨誘導(dǎo)與茜素紅染色
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MSC細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cell,間充質(zhì)干細(xì)胞)是干細(xì)胞的一種,具有向多種類型細(xì)胞分化的能力,可以分化為神經(jīng)、心臟、肝臟、骨、軟骨、肌腱、脂肪、上皮等多種細(xì)胞。在此介紹MSC細(xì)胞成骨誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)操作和鑒定間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的一個(gè)重要方法--茜素紅染色的相關(guān)實(shí)驗(yàn)流程,其原理是間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的過程中,在細(xì)胞表面沉積鈣鹽,形成鈣結(jié)節(jié),鈣離子與茜素紅螯合,被染成紅色或者紫紅色。 1、成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基的成分 DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,添加10%胎牛血清、1%青鏈霉素、1%谷氨酰胺、0.2%抗壞血酸、1% β-甘油磷酸鈉、0.01%地塞米松,將配好的誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基過濾除菌,儲存在4℃?zhèn)溆谩?br /> 2、成骨誘導(dǎo) 1)將無菌的玻片放入細(xì)胞培養(yǎng)板中,加入適量的細(xì)胞懸液,作細(xì)胞爬片; 2)37℃,5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),兩天換液一次; 3)當(dāng)細(xì)胞達(dá)到50~70%匯合后,吸去培養(yǎng)液,加入成骨誘導(dǎo)液; 4)每隔2~3天換液新鮮的成骨誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基; 5)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,誘導(dǎo)相應(yīng)時(shí)間后,進(jìn)行茜素紅染色。 3、茜素紅染色 1)去除誘導(dǎo)培養(yǎng)基,取出細(xì)胞爬片至載玻片上,用PBS洗兩次,加入4%（CH2O)n固定 30 min; 2)吸去固定液,用PBS洗兩次,滴加適量茜素紅染3~5 min; 3)去除染色液,用PBS洗兩次,干燥、封片,于鏡下觀察拍照。 4)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示: |
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