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1346753608新蟲 (初入文壇)
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[求助]
酵母 蛋白提取 三氯乙酸 丙酮 western blot
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| 最近在做釀酒酵母自噬相關(guān)的課題，在酵母蛋白提取這方面有些不明白的地方，希望能夠能到大神的解答。文獻(xiàn)中描述獲得2OD 酵母細(xì)胞后，離心去上清，加入500uL 10%的三氯乙酸沉淀蛋白，之后用預(yù)冷的1mL丙酮洗滌兩次，離心去上清風(fēng)干蛋白顆粒后加入100uL上樣緩沖液重懸蛋白，再加入等體積的酸洗玻璃珠渦旋三分鐘后煮樣，想知道丙酮洗滌的目的是去三氯乙酸嗎？加入酸洗玻璃珠的目的是什么呢？用這樣處理的蛋白樣品做western blot 顯色條帶特別淺，文獻(xiàn)里的圖條帶很清晰很漂亮，但是我的每張照片的曝光時(shí)間都在1分鐘左右，也不知道是什么原因?qū)е碌摹? |
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2樓2022-06-30 12:22:47
tevejdey
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3樓2022-08-12 10:40:30
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