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小柴不拆
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科研干貨! 13種蛋白提取方法，趕快收藏手慢無！（一）
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單層貼壁細(xì)胞總蛋白的提取： 1、倒掉培養(yǎng)液，并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養(yǎng)液 2、每瓶細(xì)胞加3ml4℃預(yù)冷的PBS。平放輕輕搖動(dòng)1min洗滌細(xì)胞，然后棄去洗液。重復(fù)以上操作兩次，共洗細(xì)胞三 次以洗去培養(yǎng)液。將PBS棄凈后把培養(yǎng)瓶置 于冰上。 3、按1ml裂解液加10ulPMSF(100mM),搖勻置于冰上。 4、每瓶細(xì)胞加400ul含PMSF的裂解液，于冰上裂解30min，為使細(xì)胞充分裂解培養(yǎng)瓶要經(jīng)常來回?fù)u動(dòng)。 5、裂解完后，用干凈的刮棒將細(xì)胞刮于培養(yǎng)瓶的一側(cè)，然后用槍將細(xì)胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。 6、于4℃下12000rpm離心5min。 7、將離心后的上清分裝轉(zhuǎn)移到0.5min的離心管中放于-20℃中保存。 組織中總蛋白的提取： 1、將少量組織塊置于1-2ml勻漿器中球狀部位，用干凈的剪刀將組織快盡量剪碎。 2、加400ul單去污劑裂解液裂于勻漿器中，進(jìn)行勻漿。然后置于冰上。 3、幾分鐘后再碾一會(huì)兒再置于冰上，要重復(fù)碾幾次使組織盡量碾碎。 4、裂解30min后，即可用移液器將裂解液移至1.5ml離心管中，然后在4℃下12000rpm離心5min，取上清分裝于 0.5ml離心管中并置于-20℃保存。 加藥物處理的貼壁細(xì)胞總蛋白的提�。� 由于受藥物的影響，一些細(xì)胞脫落下來，所以除按1）操作外還應(yīng)收集培養(yǎng)液中的細(xì)胞。以下是培養(yǎng)液中細(xì)胞總蛋 白的提�。� 1、將培養(yǎng)液倒置15ml離心管中，于2500rpm離心5min。 2、棄上清，加入4mlPBS并用槍輕輕吹打洗滌，然后2500rpm離心5min。棄上清后用PBS重復(fù)洗滌一次。 3、用槍洗干上清后，加100ul裂解液冰上裂解30min，裂解過程中要經(jīng)常彈一彈以使細(xì)胞充分裂解。 4、將裂解液與培養(yǎng)瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm離心5min，取上清分裝于0.5ml離心管中并置于-20℃保 存。 |
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