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科研萌新11新蟲 (初入文壇)
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黃曲霉毒素B1柱前三氟乙酸衍生，過高校液相色譜，梯度和等度洗脫都沒峰，怎么辦？
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根據(jù)國(guó)標(biāo)GB5009.22—2016標(biāo)準(zhǔn)，配置AFB1標(biāo)準(zhǔn)液，按柱前衍生方法進(jìn)行衍生：用移液管準(zhǔn)確吸取4.0mL凈化液于10mL離心管后在50℃下用氮?dú)饩従彽卮抵两?分別加入200μL正己烷和100μL三氟乙酸,渦旋30s,在40℃±1 ℃的恒溫箱中衍生15min,衍生結(jié)束后,在50℃下用氮?dú)饩従彽貙⒀苌捍抵两?用初始流動(dòng)相定容至1.0 mL,渦旋30s溶解殘留物,過0.22μm 濾膜,收集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。色譜參考條件列出如下: a) 流動(dòng)相:A 相:水,B相:乙腈-甲醇溶液(50+50); b) 梯度洗脫:24% B(0 min~6 min),35% B(8.0 min~10.0 min),100% B(10.2 min~ 11.2min),24% B(11.5min~13.0min); c) 色譜柱:C18柱(柱長(zhǎng)150mm 或250mm,柱內(nèi)徑4.6mm,填料粒徑5.0μm),或相當(dāng)者; d) 流速:1.0mL/min; e) 柱溫:40℃; f) 進(jìn)樣體積:50μL; g) 檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)360nm;發(fā)射波長(zhǎng)440nm; 梯度洗脫未出峰，后改方法使用等度洗脫：A相：水相：76%,B相:乙腈-甲醇溶液(50+50)24%，也未出峰；再改A相：水相：55%,B相:甲醇45%還是沒有峰，求解，一直不出峰，求大佬解釋可能出現(xiàn)的問題。 （柱子是ZORBAX Eclipse XDB 80Å C18, 4.6 x 250 mm, 5 μm ） |
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