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2280ke銅蟲 (小有名氣)
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機(jī)械損傷的大鼠PD（帕金森）腦神經(jīng)模型
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機(jī)械損傷的大鼠PD（帕金森） 6-OHDA損毀MFB造成的大鼠PD模型有兩個(gè)明顯的弊端:一是神經(jīng)元急性死亡。6-OHDA注入后15分鐘即可檢測(cè)到DA含量的下降,在第30-60分鐘時(shí)更加明顯,3-5天內(nèi)絕大多數(shù)神經(jīng)元死亡。二是損傷嚴(yán)重。經(jīng)APO誘發(fā)旋轉(zhuǎn)7圈/分以上者,黑質(zhì)內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元的死亡率已經(jīng)超過90%。可見這種模型對(duì)于研究多巴胺能神經(jīng)元慢性進(jìn)行性病變的全過程不甚理想。但由此得到啟發(fā),人們發(fā)現(xiàn)機(jī)械損傷MFB同樣可以造成黑質(zhì)內(nèi)的多巴胺能神經(jīng)元變性壞死,并且這種變化呈現(xiàn)慢性、進(jìn)行性過程。已經(jīng)建立的造模方法有MFB軸突切斷術(shù)(medial forebrain bundle axotomy)和中腦半切術(shù)(hemitransection of midbrain)。 (一)大鼠MFB切斷術(shù): 1.操作步驟 Wistar大鼠,雌性,體重185-210g。常規(guī)注射水合氯醛麻醉后,置于Kopf立體定位儀上固定。切開皮膚,暴露顱骨前囟。選擇部位在前囟后3.8mm,中線旁開2.4mm處打孔。將Kopf公司(Kopf Instruments,Tuyunga,CA,USA)生產(chǎn)的可伸縮電線刀(retractable wire knife)垂直伸入孔內(nèi)達(dá)顱骨平面下8mm處,固定外套管,將電線刀的刀刃由外套管中推出2.0-3.0mm。上提電線刀約2.5mm,然后下放回原處。再重復(fù)一次,以保證MFB充分切斷。然后回收刀刃,退出電線刀�？p合皮膚(Lapchak PA等,1993)。 2.模型檢測(cè) (1)旋轉(zhuǎn)行為學(xué)檢測(cè):術(shù)后4周,將大鼠腹腔內(nèi)注射AMPH(5mg/kg)誘發(fā)大鼠旋轉(zhuǎn)。計(jì)數(shù)90分鐘內(nèi)的旋轉(zhuǎn)次數(shù)。 (2)其它檢測(cè):病理和生化檢測(cè)與6-OHDA損毀模型同。 (二)中腦半切術(shù)(hemitransection of midbrain) 1.操作步驟 SD大鼠,雌雄不拘,體重200-250g。常規(guī)方法麻醉,立體定位儀上固定和暴露顱骨前后囟。在前囟后1mm,中線旁開0.5mm處打孔。將以特制的4mm寬的刀,沿與顱骨成68度角的方向,斜插入9mm,然后將刀退出�？p合皮膚。(Toffano G等,1984) 2.模型檢測(cè) (3)旋轉(zhuǎn)行為學(xué)檢測(cè):術(shù)后8周,皮下注射APO(0.25mg/kg),誘發(fā)大鼠向健側(cè)旋轉(zhuǎn)。 (4)其它檢測(cè):病理和生化檢測(cè)與6-OHDA損毀模型相似。 注: 1.有報(bào)道表明MFB切斷后18和19天后黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元存活率分別為44%和 50%(Knusel B等,1993; Lapchak P A等,1993)此時(shí)可模擬早期PD的病理改變。 2.逆行追蹤顯示MFB切斷的成功率為92-99%。可見用該方法造模成功率高,較為經(jīng)濟(jì)。 3.MFB切斷后,黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元呈現(xiàn)漸進(jìn)性地死亡,可以模擬PD病理變化的全過程,對(duì)于研究神經(jīng)元的再生和PD的預(yù)防作用尤為合適。 4.切斷術(shù)后短時(shí)間內(nèi),損傷的程度不嚴(yán)重,用APO難以誘發(fā)出大鼠的旋轉(zhuǎn)行為。誘發(fā)這種異常旋轉(zhuǎn)行為要在損傷后相對(duì)較長的一段時(shí)間內(nèi)(約2月以上)。 |
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