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xuannnn新蟲 (正式寫手)
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[求助]
大腸桿菌感受態(tài)制備
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請(qǐng)教各位，如何只用一管大腸桿菌感受態(tài)（100ul）制備很多新的大腸桿菌感受態(tài)？（小白從網(wǎng)上查到這個(gè)方法，請(qǐng)各位幫忙看看是否正確，或者是否有更好的方法，謝謝大家�。。。� （一）受體菌的培養(yǎng) (1)從LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α單菌落，接種于3～5mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃下振蕩培養(yǎng)過夜（12h左右）。 (2)將該菌種懸液以1:100的比例接種，取250μL菌液轉(zhuǎn)接到25mL LB液體培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)2～3h至OD600＝0.5左右。 （二）感受態(tài)細(xì)胞的制備（注意：以下操作在超凈工作臺(tái)完成。） (1)將菌液轉(zhuǎn)入50mL離心管中，冰上放置10min。 (2)在4℃下，4000r/min離心10min。棄去上清，將管倒置1min以便培養(yǎng)液流盡。 (3)用冰上預(yù)冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液10mL輕輕懸浮細(xì)胞，冰上放置30min。 (4)0～4℃ 4000r/min離心10min，棄去上清，加入2mL預(yù)冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液，輕輕懸浮細(xì)胞，冰上放置（務(wù)必冰上放置）。 （注意：以上操作完成了新鮮感受態(tài)細(xì)胞的制備） （三）感受態(tài)細(xì)胞的分裝與凍存 (1)在2mL制備好的感受態(tài)細(xì)胞中加入2mL30%甘油（即1:1體積，甘油終濃度15%）。 (2)將此感受態(tài)細(xì)胞分裝成每份200μL (1.5mL dorf管)，液氮速凍，快速轉(zhuǎn)入-70℃冰箱保存。（如果沒有液氮，可以將分裝的感受態(tài)細(xì)胞直接轉(zhuǎn)入-70℃冰箱保存。） |
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