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云之遙V新蟲 (初入文壇)
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[求助]
畢赤酵母pGAPZαA轉(zhuǎn)化染菌問題 已有1人參與
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求助畢赤酵母轉(zhuǎn)化過程中的問題，使用的是pGAPZαA質(zhì)粒，Zeocin濃度100ug/ml，感受態(tài)使用山梨醇處理制備而成，現(xiàn)做現(xiàn)用，轉(zhuǎn)化后對照平板總是長菌，不知道原因，師姐就沒遇到過類似問題，本人懷疑可能有以下幾個可能原因： 1.抗生素濃度不夠，但師姐同樣的質(zhì)粒50ug/ml都沒出現(xiàn)過這種問題�。�！ 2.電轉(zhuǎn)時加菌液過多，自己加了200ul，文獻都是100ul，導(dǎo)致 轉(zhuǎn)化效率不夠，但為什么會長菌呢？ 3.離心涂布時留菌液太多，留100ul和200ul，我都試過，100ul涂布比較干，200ul比較濕潤，難道這也影響？ 4.100ml菌液，od1.3左右，感受態(tài)制備4，5管，難道說菌太多抗生素?zé)o法抑制？之前做過分裝10管的話對照不會長菌，但會不會影響轉(zhuǎn)化效率，而且別人正常分裝4,5管也沒事呀，哭了。。。 求助大神幫忙解決，很平常的轉(zhuǎn)化一直困擾我很久了。  |
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新蟲 (小有名氣)
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- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
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一些建議： 1.轉(zhuǎn)化用菌株驗證一下，是不是染菌了，自帶了zeocin抗性 2. 電轉(zhuǎn)杯污染，重新處理電轉(zhuǎn)杯，重新轉(zhuǎn)化。(電轉(zhuǎn)過程，比如菌液分裝量，涂布之類的，對實驗結(jié)果一般不會有太大的影響的) 祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2022-03-16 11:00:14
3樓2022-03-23 22:50:24
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