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多肽片段：FKALKALKKALKALK 15mg 95% 多肽合成 1. 根據(jù)理論計算值稱取0.5g（取代度0.3） 二氯樹脂于30 ml的反應(yīng)器中，用50ml的DCM浸泡30min,DMF洗滌3次。 2 稱取片段第一個氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH 150mg ，加入DCM將其溶解，然后加入0.2ml的DIEA反應(yīng)1.5-2h。 3. 2小時后，用甲醇溶液封頭（甲醇：DIEA : DCM=1：1：2)半小時，然后用DMF洗滌四次，抽干待用。 4. 向反應(yīng)器中加入適量的20%哌啶溶液（哌啶/DMF=1:4），反應(yīng)20 min，以此來脫去Fmoc保護基團。脫完保護后用DMF洗滌四次，然后抽干。 5. 取少量樹脂用茚三酮法檢測，樹脂有顏色，則脫保護成功。 6. 稱取片段的C端第二個氨基酸Fmoc-Ala-OH 0.45mmol (第一個氨基酸摩爾量的3倍）和0.45mmol HOBT，加入少量（剛好沒過樹脂）DMF將其溶解，然后加入0.2 ml的DIC到反應(yīng)器中。 7. 半小時后，取少量樹脂檢測，用茚三酮法檢測，若樹脂有顏色，則縮合不完全,繼續(xù)反應(yīng)；若樹脂為無色，則反應(yīng)完全。 8. 待反應(yīng)完全后，用DMF洗滌樹脂四次，然后抽干，向反應(yīng)器中加入一定量的20%哌啶（哌啶/DMF=1:4），脫去樹脂上的Fmoc保護基團。脫完保護后用DMF洗滌四次，然后抽干。 9. 取少量樹脂用茚三酮法檢測，樹脂有顏色，說明脫保護成功。 10. 按照步驟7-10依次接上片段1的剩余氨基酸 11. 脫去片段1最后一個氨基酸N端的Fmoc保護。 12.切割：稱量反應(yīng)后的樹脂加入10倍體積的切割液，反應(yīng)1.5-2h（切割液：95%TFA+2%EDT+2%Tis+1%H2O），濾掉樹脂，加入4-5倍體積的乙醚離心，去掉上清液，再用乙醚洗滌三次。 13.通過高效液相色譜儀器（HPLC）將目標肽段與雜質(zhì)分離，將目標肽段凍干成粉末，并送QC質(zhì)檢 14.QC檢測純度（HPLC）,分子量（MS）均合格后，產(chǎn)品包裝發(fā)貨。 更多問題交流，請隨時聯(lián)系小編！�。。。。�！ |
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2樓2022-04-07 16:00:39
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