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WB時(shí)，上方時(shí)常出現(xiàn)非特異性條帶: 領(lǐng)取紅包 (小木蟲(chóng)手機(jī)app專(zhuān)屬紅包)

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問(wèn)題描述：WB相關(guān)問(wèn)題�。�！
最近一直在做WB，但是出現(xiàn)一個(gè)不正常的情況，前面驗(yàn)證抗體的時(shí)候，抗體是比較好的，但是后面正式開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，在目的條帶的上方總是出現(xiàn)一個(gè)非特異性條帶，并且顏色很深，后面重復(fù)幾次之后，發(fā)現(xiàn)同一批蛋白樣品有時(shí)出現(xiàn)這樣的情況，有時(shí)會(huì)恢復(fù)正常，且同一批做的其他的抗體也會(huì)同時(shí)出現(xiàn)這種現(xiàn)象（正常的時(shí)候都正常，不出現(xiàn)上線的帶，不正常的時(shí)候都不正常，所有抗體上面都出現(xiàn)一條帶。
請(qǐng)大家?guī)蛶兔�，困擾了很久的問(wèn)題，謝謝！

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1樓 2022-01-25 17:30:11

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劉楠楠05

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

你正常情況下，也是三條帶，只是最上面那個(gè)帶弱，說(shuō)明抗體是能敷出這個(gè)帶，是多克隆抗體吧？你說(shuō)的非正常條帶是最上面那個(gè)雜帶很亮，是蛋白裂解問(wèn)題，還是蛋白降解問(wèn)題？下次注意細(xì)胞裂解和降解問(wèn)題，同時(shí)可以試試把這個(gè)雜帶跑分開(kāi)，剪掉。

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6樓2022-01-25 19:38:21

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6樓: Originally posted by 劉楠楠05 at 2022-01-25 19:38:21
你正常情況下，也是三條帶，只是最上面那個(gè)帶弱，說(shuō)明抗體是能敷出這個(gè)帶，是多克隆抗體吧？你說(shuō)的非正常條帶是最上面那個(gè)雜帶很亮，是蛋白裂解問(wèn)題，還是蛋白降解問(wèn)題？下次注意細(xì)胞裂解和降解問(wèn)題，同時(shí)可以試試把 ...

這兩個(gè)圖是同一批樣品做的，同一批樣品，條件都一樣的情況下，就會(huì)有這兩種情況。并且同一批樣品，做不同的蛋白也會(huì)有這樣的情況，發(fā)生這種情況的時(shí)候3個(gè)抗體一起發(fā)生，正常的話就一起正常。

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7樓2022-01-26 10:18:23

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shuaibia6

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我對(duì)wb不是很了解，但是從PAGE膠圖來(lái)看造成這種現(xiàn)象的原因應(yīng)該是這2次電泳的遷移速率不一樣，導(dǎo)致膠圖呈現(xiàn)不一樣的效果。

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8樓2022-01-26 11:11:04

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劉楠楠05

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7樓: Originally posted by 上善若水白楊 at 2022-01-26 10:18:23
這兩個(gè)圖是同一批樣品做的，同一批樣品，條件都一樣的情況下，就會(huì)有這兩種情況。并且同一批樣品，做不同的蛋白也會(huì)有這樣的情況，發(fā)生這種情況的時(shí)候3個(gè)抗體一起發(fā)生，正常的話就一起正常。
...

沒(méi)見(jiàn)過(guò)這種情況，樣本降解的可能性大，建議問(wèn)技術(shù)，或者換抗體

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9樓2022-01-26 11:14:44

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8樓: Originally posted by shuaibia6 at 2022-01-26 11:11:04
我對(duì)wb不是很了解，但是從PAGE膠圖來(lái)看造成這種現(xiàn)象的原因應(yīng)該是這2次電泳的遷移速率不一樣，導(dǎo)致膠圖呈現(xiàn)不一樣的效果。

謝謝你，我也一直在考慮膠的問(wèn)題，因?yàn)閃B需要有濃縮膠和分離膠，小電壓跑過(guò)濃縮膠，再大一些電壓跑分離膠。會(huì)不會(huì)是濃縮膠做的太長(zhǎng)，導(dǎo)致大電壓下跑濃縮膠，而有一部分進(jìn)入了分離膠，這樣造成了蛋白分離了，一部分在上一部分在下。

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10樓2022-01-26 20:09:46

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tzynew2樓

2022-01-25 17:32 回復(fù)

上善若水白楊(金幣+1): 謝謝參與

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花小花?3樓

2022-01-25 18:11 回復(fù)

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yongde4樓

2022-01-25 18:12 回復(fù)

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Silence_925樓

2022-01-25 18:17 回復(fù)

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