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醫(yī)學(xué)生物科研銅蟲 (小有名氣)
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【實(shí)驗(yàn)方法】構(gòu)建膿毒血癥動(dòng)物模型
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膿毒血癥是機(jī)體神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌、凝血等系統(tǒng)功能嚴(yán)重受損后其中各種有害性刺激(主要是外源性微生物)可激活機(jī)體免疫細(xì)胞導(dǎo)致大量促炎細(xì)胞因子生成和釋放進(jìn)而引起炎癥的瀑布樣級(jí)聯(lián)反應(yīng)在全身炎性反應(yīng)的進(jìn)行性加重方面起關(guān)鍵作用。目前在膿毒血癥的研究已達(dá)分子水平臨床上治療手段也日趨完善但膿毒血癥、膿毒血癥休克、多器官功能不全乃至最終多器官功能衰竭仍是外科危重患者死亡的主要原因。本文介紹一種簡(jiǎn)單的盲腸結(jié)扎穿刺法(cecum ligation and puncture,CLP)構(gòu)建膿毒血癥模型，為臨床研究英定模型基礎(chǔ)。 選取體重為21~250的小角(BALB/或者C57均可，也可用體重為2200左右的SD大食)維雄不限。動(dòng)物適應(yīng)性飼差3-5天實(shí) 驗(yàn)前禁食12h。按60u/10g體重的劑量經(jīng)腹腔注5%的水合氨醉麻醉后，將動(dòng)物伽臥固定干手術(shù)板上胸部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒與去毛無(wú)菌條件下用手術(shù)刀在腹壁作一長(zhǎng)約2cm切口經(jīng)切口，進(jìn)腹在回盲瓣遠(yuǎn)端分離并以3號(hào)絲線結(jié)扎1/3處盲腸用18號(hào)注射針頭于結(jié)扎端穿孔并擠出糞便少許盡量避免損傷血管，然后用4號(hào)絲線間斷縫合腹膜及皮膚同時(shí)立即皮下注射生理鹽水50ml/kg體重抗休克。 造模后小鼠逐漸出現(xiàn)堅(jiān)毛、腹瀉、膿尿模型動(dòng)物表現(xiàn)出飲水、進(jìn)食及活動(dòng)次數(shù)減少，動(dòng)物常于術(shù)后12h全身炎性反應(yīng)達(dá)峰值小良活動(dòng)次數(shù)明顯減少且活動(dòng)失去晝夜規(guī)律，應(yīng)用動(dòng)物進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔是復(fù)制臨床膿毒癥模型尤其是胃腸穿孔的最佳動(dòng)物模型它能很好地反映出膿毒血癥發(fā)展過程中免疫學(xué)及血流動(dòng)力學(xué)的雙向變化。 注意事項(xiàng): 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的體重要適當(dāng)，不能過大也不能過小2手術(shù)環(huán)境及手術(shù)器械要嚴(yán)格注意消毒 3手術(shù)完成后要及時(shí)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行保溫和補(bǔ)液，以減少死亡率 |
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