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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者啊咩將贈送您 5 個金幣 | ||
[求助]
使用EGFP r引物加自身上游引物P不出來，35S加自身上下游引物能P出來是怎么回事呢
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蟲友們，有問題求助， 是這樣的，我構建載體，連終載體驗證的時候用的35S和自身下游進行PCR驗證，都有條帶我就繼續(xù)做了（其實這里送去測序就發(fā)現(xiàn)35S方向的測序都有結果，egfp測序的結果都出不來，所以我中間設計引物加測，得出結果是序列正確也有EGFP部分），然后終載體轉農(nóng)桿菌驗證的時候用egfp和35S進行菌P，P不出來，然后我做了35s加自身下游以及自身上游加egfpR的菌P，前者都有條帶且正確，后者都無條帶，連質粒也無結果。想求問這是什么情況呢？ egfp引物應該是沒問題的，因為我把別人的質粒做模板P了一下能出條帶，終載體質粒應該也沒問題，和我用同一管終載體質粒的同學已經(jīng)完成了構建，現(xiàn)在這個問題不是我特有，另外一個師姐有這個問題，egfp加自身上游引物P不出來。 |
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