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小小書(shū)蟲(chóng)飛新蟲(chóng) (小有名氣)
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基于ERA核酸快檢擴(kuò)增 Cas12a 突變體，用于檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌中的鏈霉素耐藥基因突變
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耐藥結(jié)核病（TB）是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題，威脅著全球結(jié)核病的預(yù)防和控制。 我國(guó)是耐藥結(jié)核高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，約有1/4－1/5耐多藥結(jié)核病人發(fā)生在中國(guó)，耐藥結(jié)核病的流行情況較為嚴(yán)重，2007～2008年開(kāi)展的全國(guó)結(jié)核病耐藥性基線調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)肺結(jié)核患者中耐多藥率為8.3%，據(jù)此估算，我國(guó)每年新發(fā)耐多藥患者12萬(wàn)例，占全球每年新發(fā)總數(shù)的24.0%，位列全球第二位。 而在近日，國(guó)家傳染病臨床研究中心研究者擴(kuò)增偶聯(lián) Cas12a 突變體的模塊，通過(guò)由先達(dá)基因研發(fā)的酶促恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA技術(shù)），開(kāi)發(fā)出Cas12 檢測(cè)系統(tǒng)，可以識(shí)別更多非傳統(tǒng)的原始間隔區(qū)相鄰基序靶向序列，可以快速治療和預(yù)防STR耐藥結(jié)核病的疾病傳播，有助于減少疾病傳播和死亡率。 結(jié)核分枝桿菌的藥敏試驗(yàn)是許多國(guó)家診斷耐藥肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)。但由于設(shè)備昂貴、污染率高、方法學(xué)耗時(shí)長(zhǎng)，不利于疾病的早期診斷。耐藥結(jié)核病陽(yáng)性檢出率低，缺乏快速、靈敏的檢測(cè)方法，使大多數(shù)耐藥結(jié)核病患者無(wú)法得到及時(shí)治療。這導(dǎo)致疾病傳播增加導(dǎo)致死亡人數(shù)增加，給結(jié)核病的防控帶來(lái)諸多困難。 因此，迫切需要一種簡(jiǎn)單、快速、高靈敏度的耐藥結(jié)核病檢測(cè)方法。 而Sherlock的最吸引人的特點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)的快速性。與傳統(tǒng)PCR相比，酶促恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（ERA技術(shù)）可以將核酸擴(kuò)增時(shí)間控制在30 min以內(nèi)，簡(jiǎn)化了核酸擴(kuò)增過(guò)程，縮短了擴(kuò)增時(shí)間，且操作簡(jiǎn)單，靈敏度也可與PCR相媲美。 在此次研究中，目標(biāo)基因通過(guò)ERA在基因組中擴(kuò)增，并被 Cas12a RR 識(shí)別。同時(shí)，Sherlock 的單核苷酸特異性也被應(yīng)用于與M.tb相關(guān)的突變。STR抗性具有高靈敏度和特異性，即使目標(biāo)基因含量為總樣本量的0.1%，Cas12a RR也能識(shí)別該基因。 與藥敏實(shí)驗(yàn)和基因組測(cè)序相比，Cas12a檢測(cè)系統(tǒng)具有更高的靈敏度和特異性，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程可在60 min內(nèi)完成，在樣本處理上也更有優(yōu)勢(shì)。這為耐藥結(jié)核病患者的及時(shí)診斷和治療帶來(lái)了希望。 原文鏈接：https://doi.org/10.3389/fmicb.2021.796916 |
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