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ArthurFSun鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
293細胞生產重組蛋白，上清中檢測不到 已有3人參與
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大家好， 請教一個問題。 最近我在用293F細胞表達帶HIS標簽的重組蛋白。培養(yǎng)體系是600 mL。我發(fā)現(xiàn)轉染36小時后，用western blot和免疫熒光可在細胞內檢測到有目的蛋白表達。但在轉染后24-120 h的任何時間點，在上清中用 western blot卻檢測不到目的蛋白。用超濾管將上清濃縮10倍，western blot仍然檢測不到目的蛋白。將轉染后36h的上清掛鎳柱，洗脫時沒有出現(xiàn)目的蛋白峰。 請問，（1）上清中檢測不到蛋白可以能什么原因？是因為蛋白不分泌嗎？蛋白帶有天然信號肽，理論上是應該分泌的。western blot檢測不到是因為分泌量太低嗎？擴大培養(yǎng)體系有可能檢測的蛋白嗎？ （2）我用的培養(yǎng)基的廠家說明書推薦細胞培養(yǎng)5天后收獲培養(yǎng)基純化蛋白，但是我發(fā)現(xiàn)，細胞培養(yǎng)48小時已經變暗，細胞數(shù)目也開始下降。請問有經驗的前輩，293F細胞表達蛋白時，細胞密度多大時開始轉染？轉染后一般培養(yǎng)幾天后開始純化蛋白？ 謝謝！ |
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Arp熱愛SC
鐵蟲 (初入文壇)
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3樓2023-03-26 20:49:43
2樓2022-05-24 13:39:07
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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Polycystine-poly(His,Arg)1:5 (CHR) transfection of CHO-DG44 cells for the production of recombinant IgG antibody CHO-DG44 cells, CHO-K1 cells and MEFs CHR is composed of 100% amino acids,without any cytotoxic PEI. CHR-mediated transfection does not require complexpre-formation, works well in serum-containing media and is biodegradable, which may prevent cumulative cytotoxicity and facilitates downstream processing. |
4樓2023-04-01 13:05:51
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