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醫(yī)學(xué)生物科研銅蟲(chóng) (小有名氣)
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細(xì)胞骨架染色神器——鬼筆環(huán)肽!
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鬼筆環(huán)肽（又稱鬼筆鵝膏素）是從毒蕈類鬼筆鵝膏中得到的有毒環(huán)狀七肽，能選擇性的與動(dòng)植物體內(nèi)的肌動(dòng)蛋白結(jié)合，其作用與細(xì)胞松弛素Ｂ恰好相反，只與聚合的微絲結(jié)合，而不與肌動(dòng)蛋白單體分子結(jié)合，使鬼筆環(huán)肽染色成為研究細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白微絲的有力工具，是細(xì)胞骨架的染色神器。光學(xué)顯微鏡下, 熒光標(biāo)記過(guò)的鬼筆環(huán)肽可以清晰地顯示出細(xì)胞內(nèi)微絲的形態(tài)和分布，已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究中。 染色 · 步驟 此處以MG-63細(xì)胞爬片為例簡(jiǎn)述鬼筆環(huán)肽染色步驟： 將MG-63細(xì)胞接種在放置玻片的培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)； 細(xì)胞培養(yǎng)至80-90%滿時(shí)，用37℃預(yù)熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細(xì)胞2次； 使用溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定，室溫固定10min； 室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min； 室溫條件下，用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min； 室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min； 取200μL配制好的羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液，覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞，室溫避光孵育30min； 用PBS清洗蓋玻片3次，每次5min； 使用200μL DAPI溶液（濃度：100 nM）對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，約30s； 共聚焦顯微鏡或熒光顯微鏡下觀察采集圖像。 鬼筆環(huán)肽無(wú)法穿越細(xì)胞膜， 不能直接應(yīng)用于活細(xì)胞的染色。 |
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