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醫(yī)學生物科研銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【實驗步驟】石蠟切片HE染色
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1.組織包埋 (1)乙醇脫水:組織經(jīng)不同濃度的乙醇溶液進行逐級脫水70%80%90%95%100%100%，各級乙醇40min(注意:骨性及鈣化組織需在JYBL-Ⅱ脫鈣液中浸泡24h，待組織軟化后再進行乙醇脫水步驟); (2)透明:組織依次浸泡于三個二甲苯中，每缸各1h; (3)漫蠟:組織依次漫泡于三個石蠟缸中，每缸各1h; (4)包埋:將液態(tài)的石蠟倒入模具盒中，再將浸好蠟的組織塊平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蠟凝固后去掉包埋框，完全冷卻變硬后再修整蠟塊，組織外圍的石蠟保留適中以便切片。 2.切片制作 將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上，使蠟塊的切面與刀口成平行方向，刀的傾斜度通常15℃，轉動輪轉推進器，調節(jié)切片厚度為4um，切成厚度均勻的切片。左手持毛筆，右手旋動切片機轉把，切片帶出來之后用毛筆輕輕托起，再用鑷子輕鑷蠟片，以正面放入展片箱中，其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端，垂直入水去附貼切片，右手用鑷子輔助推動，附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后，放在空氣中稍晾干，放置65℃烤片機上烤1h，再放置烘箱內烘烤2h。 3.石蠟切片脫蠟至水 依次將石蠟切片放入二甲苯I10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無水乙醇I5min-無水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟。 4.HE染色 石蠟切片入蘇木素染0.5-1分鐘min，自來水漂洗，1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水漂洗，然后1%氨水水溶液返藍1min流水沖洗數(shù)秒放入伊紅染液中染色數(shù)秒，流水漂洗。 5.脫水封片 石蠟切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-無水乙醇5min-無水乙醇5min-二甲苯5min透明，將切片從二甲苯拿出來中性樹膠封片。 6.結果判讀. 細胞核為藍色，細胞質為紅色 |
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