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Lea__新蟲 (著名寫手)
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[求助]
金黃葡萄球菌及枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備及質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 已有2人參與
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最近一直往金葡和枯草里導(dǎo)入質(zhì)粒進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，用的是ATCC6538和ATCC6633，RP4 plasmid。是不是野生型的這兩種陽性菌無法形成感受態(tài)？還是宿主是陰性菌的大質(zhì)粒RP4無法進(jìn)入陽性菌？查了一些感受態(tài)制備方法都試過了，還是無法導(dǎo)入質(zhì)粒。 是否用金葡RN4220和枯草WB600支撐感受態(tài)細(xì)胞的效果會(huì)更好一些？有沒有蟲友推薦一些易于制備感受態(tài)細(xì)胞的這兩種菌？我們可以交換或者購買都行～ 還是RP4本身無法在陽性菌中存在，需要其他質(zhì)粒載體或者穿梭質(zhì)粒？比如pC194等？想請教下大佬們做陽性菌的轉(zhuǎn)化的大多用哪種質(zhì)粒比較容易轉(zhuǎn)進(jìn)去？我們需要質(zhì)粒上帶有抗生素耐藥基因即可。之前一直做的是陰性菌..感覺有很多細(xì)節(jié)還不十分清楚，希望得到大神們的指點(diǎn)，還請不吝賜教！感激不盡！  |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Lea__: 金幣+50, ★★★很有幫助 2021-12-11 19:36:29
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
Lea__: 金幣+50, ★★★很有幫助 2021-12-11 19:36:29
| 普通大腸桿菌如DH5α擴(kuò)增的質(zhì)粒是無法經(jīng)過電轉(zhuǎn)化或者化學(xué)轉(zhuǎn)化進(jìn)題主所述的金黃色葡萄球菌中的，需要經(jīng)過相應(yīng)菌株甲基化修飾的質(zhì)粒才可以，如大腸桿菌DC10B或者金黃色葡萄球菌RN4220。也可以通過噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式進(jìn)行。 |
3樓2021-12-10 09:03:38
2樓2021-12-08 20:31:26
Lea__
新蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 2670.5
- 散金: 1958
- 帖子: 1133
- 在線: 20.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 20863778
- 注冊: 2020-02-11
- 專業(yè): 有機(jī)分析
送紅花一朵 |
是的我查到的是RN4220能夠制成感受態(tài)細(xì)胞，您的意思是質(zhì)粒也需要經(jīng)過甲基化修飾處理才可以導(dǎo)入？我查閱了一些文獻(xiàn)，找到了一些宿主是陽性菌的質(zhì)粒比如pC194/pC221/pPL708等，但我不知道它們是不是經(jīng)過您說的甲基化修飾....這些在網(wǎng)上都有賣，但因?yàn)椴淮_定能否導(dǎo)入現(xiàn)在還不太敢購買。我做的不是分子這塊的，只是需要攜帶質(zhì)粒的陽性菌去進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不知道好不好買到這樣的現(xiàn)成的菌/質(zhì)粒... |
4樓2021-12-11 19:43:08
5樓2021-12-13 08:29:13
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