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a568857414新蟲 (初入文壇)
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[求助]
設(shè)計(jì)的在不同PH下測(cè)定的酶活 這個(gè)方法有沒有問題？ 已有1人參與
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1.配制不同PH的緩沖液，PH（2.0-6.0）的緩沖液使用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液；PH（6.0-9.0）的緩沖液使用PBS緩沖液。 2.稱量適量馬鈴薯淀粉，加入1mol·L-1的NaOH溶液加入適量PH2.0的PBS緩沖液，超聲均勻，最后定容至0.1（w·v-1）。依次將緩沖液更換成PH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的緩沖液。 3.將酶液稀釋10倍 50μl酶液+450μl直鏈淀粉作為實(shí)驗(yàn)組 50μl緩沖液+450μl底物微升底物混合物作為對(duì)照組 500μl緩沖液作為空白組 4.將實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、空白組放置37°C下反應(yīng)10分鐘。反應(yīng)結(jié)束后取出200微升反應(yīng)液加入4mlLugol’s碘液以終止反應(yīng)，并測(cè)量其在660nm下的吸光值。 這樣設(shè)計(jì)在不同PH下測(cè)定酶活的方法正確嗎？有人幫解答嗎？好心人給提出建議啊 加ph緩沖液應(yīng)該加多少？naoh 應(yīng)該加多少？ |
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pennchem
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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一般pH dependent assay會(huì)用到混合的buffer 如pH https://www.jbc.org/article/S0021-9258(18)53020-9/pdf good luck! |
2樓2021-12-08 13:36:03
pennchem
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3樓2021-12-08 13:37:29
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4樓2023-08-05 17:47:15
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