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懸浮培養(yǎng)新蟲 (初入文壇)
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[交流]
細(xì)胞培養(yǎng)
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在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。 一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁 可能原因： ●胰蛋白酶消化過度 ●支原體污染 ●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解） ●細(xì)胞老化 ●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高 解決方法： ●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度 ●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 ●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2 ●啟用新的保種細(xì)胞 ●調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度 二、懸浮細(xì)胞成簇 可能原因： ●培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子； ●支原體污染； ●蛋白酶過度消化使得細(xì)胞裂解； ●DNA污染 解決方法： ●用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞，輕巧吹吸細(xì)胞獲得單細(xì)胞懸液； ●分離培養(yǎng)物，檢測支原體； ●用DNaseI處理細(xì)胞 三、培養(yǎng)細(xì)胞生長緩慢 可能原因： ●由于更換不同培養(yǎng)液或血清； ●培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞； ●培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染； ●試劑保存不當(dāng)； ●接種細(xì)胞起始濃度太低； ●細(xì)胞已老化； ●支原體污染 解決方法： ●比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長實驗，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； ●換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加谷氨酰胺及生長因子； ●用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物； ●血清需保存在-10到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完全培養(yǎng)液在2-8℃保存，需在1周內(nèi)用完； ●增加接種細(xì)胞起始濃度； ●換用新的保種細(xì)胞； ●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。 四、培養(yǎng)細(xì)胞生長不好 可能原因： ●細(xì)胞本身的狀態(tài) 細(xì)胞傳代次數(shù)多，細(xì)胞老化； 細(xì)胞的接種量：接種量過低，細(xì)胞生長緩慢； 細(xì)胞傳代時間過晚：細(xì)胞中毒，影響傳代后的細(xì)胞生長； 胰酶消化時間過長或過短：時間過長，細(xì)胞死亡；時間過短，細(xì)胞未完全分離而成團(tuán)，細(xì)胞死亡； 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇：慢凍速融。 ●污染 支原體污染 霉菌污染 ●培養(yǎng)基或血清 更換血清或培養(yǎng)基之前未進(jìn)行驗證 選擇的培養(yǎng)基是否合適 培養(yǎng)基配制是否準(zhǔn)確無誤 ●培養(yǎng)環(huán)境 CO2供應(yīng)是否正常 培養(yǎng)箱或搖床溫度控制是否正確 ………… 解決方法： 根據(jù)以上四個方面的可能原因，做出針對性的解決方案 ●注意細(xì)胞的本身狀態(tài)：如傳代次數(shù)、接種量等； ●避免產(chǎn)生污染（用正規(guī)、合法、可溯源的血清） ●要用合適的血清或培養(yǎng)基，最好經(jīng)過驗證 ●注意實驗室的環(huán)境 五、培養(yǎng)細(xì)胞死亡 可能原因： ●培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2； ●培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大； ●細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷； ●培養(yǎng)液滲透壓不正確； ●培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 解決方法： ●檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2； ●檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度； ●取新的保存細(xì)胞種； ●檢測培養(yǎng)液滲透壓； ●換入新鮮培養(yǎng)液 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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