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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白/酶 » SILAC定量蛋白質組
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醫(yī)學生物科研銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
SILAC定量蛋白質組
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SILAC ( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術是利用哺乳動物細胞增殖對必需氨基酸的依賴性原理而設計的代謝標記蛋白質的方法。SILAC技術應用于定量蛋白質組研究,為全面、系統(tǒng)地定性和定量分析復雜哺乳動物細胞蛋白質組提供了有效的方案,是目前最先進的、進行細胞中蛋白質相互作用和蛋白質表達差異的定量蛋白質組學技術。 技術特點 1、高效性:SILAC是體內(nèi)標記技術,標記效率可高達100%; 2、定量精確,線性范圍廣,降低由于樣品制備、實驗操作和儀器設備造成的實驗誤差,定量重復性好; 3、體內(nèi)代謝標記與SDS-PAGE或色譜分離技術相結合,兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白,不受蛋白性質限制; 4、由于該技術屬于體內(nèi)標記,標記效果穩(wěn)定,其標記效率不受裂解液的影響,不僅適合于進行全細胞蛋白的分析,還適合于膜蛋白的鑒定和定量; 5、與化學標記相比,SILAC方法蛋白需要量明顯減少,通常每個樣品只需要幾十微克的蛋白量; 6、活體標記,更接近樣品真實狀態(tài); 7、相容性:可以對多種在DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)基中能夠培養(yǎng)的細胞或細菌中表達的蛋白進行標記。 適用范圍 藥物作用靶點研究 疾病標志物篩選 只適用于活體培養(yǎng)的細胞,對于生物醫(yī)學研究中常用的組織樣品,體液樣品等無法分析,對于動物模型的標記成本太大,無法實現(xiàn) 要求物種含有已完成全基因組測序或轉錄組測序注釋的CDS信息 |
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