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落日余暉34木蟲 (正式寫手)
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[求助]
一種酶是否需要多種輔酶才能發(fā)揮酶活呢？
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1.各位蟲友好，最近在做的酶的催化時，發(fā)現(xiàn)該酶不僅需要NADH，也需要FMN，請問這種酶需要這兩種輔酶才能發(fā)揮酶活嗎？但是從酶活測定上看，只有NADH被消耗了，那這FMN的作用是什么呢？ 2.另外為什么要選擇磷酸鉀緩沖液呢？磷酸鈉是否也可以呢，鉀鈉在酶催化上游什么區(qū)別嗎？ 3.以下是酶活驗(yàn)證步驟，請各位蟲友指教了：The enzyme assay of ca2ENR was performed by monitoring the consumption of NADH using a DU® 800 UV/Visible Spectrophotometer . A reaction mixture containing 100 mM potassium phosphate (pH 7.0), 0.2 mM NADH, 5 μM FMN and 5 μM purified ca2ENR protein was prepared in a quartz cuvette with a butyl rubber stopper. After replacing the head space with nitrogen gas, a reaction was initiated by addition of 10 mM 4ACA at 30 °C. The reduction of 4ACA into 4AHCAwas measured as the decrease in absorbance at 370 nm due to oxidation of NADH. |
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