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醫(yī)學(xué)生物科研銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【實(shí)驗(yàn)方法】細(xì)胞劃痕
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細(xì)胞劃痕愈合法是測定細(xì)胞遷移運(yùn)動與愈合能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上,用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時間,取出細(xì)胞培養(yǎng)板,觀察周邊細(xì)胞是否生長(修復(fù))至中央劃痕區(qū),以此判斷細(xì)胞的生長遷移及修復(fù)能力。 特點(diǎn): 1. 在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程。 2. 非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)(ECM),細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移。 3. 與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容,可用于分析細(xì)胞間的相互作用。 4. 研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡單的方法。 傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)步驟: 1. 培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記(方便拍照時定位同一 個視野)。 2. 細(xì)胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底)。 3. 細(xì)胞鋪滿板底后,用1 ml槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這也是該方法最大的缺陷。) 4. 吸去細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。 5. 加入無血清培養(yǎng)基,拍照記錄。 6. 將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),每隔4-6小時取出拍照。 7. 根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 |
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