 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 795 | 回復(fù): 0 | |||
北京艾柏森鐵蟲 (小有名氣)
|
[交流]
細(xì)胞衰老檢測(cè)方法與步驟
|
|
細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。眾所周知，衰老的細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大，呈扁平狀；細(xì)胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動(dòng)性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細(xì)胞所具有的上述特征成為各種細(xì)胞衰老檢測(cè)手段的依據(jù)。 其中，對(duì)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶的檢測(cè)是有效檢測(cè)細(xì)胞衰老的經(jīng)典方法。X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷）是β-半乳糖苷酶的底物，X-Gal本身無(wú)色，經(jīng)β-半乳糖苷酶水解后產(chǎn)生半乳糖和藍(lán)色的5-溴-4-氯-靛藍(lán)。利用X-Gal的這個(gè)特點(diǎn)，可以間接對(duì)β-半乳糖苷酶的活性進(jìn)行測(cè)定。衰老細(xì)胞中的溶酶體內(nèi)容物通常增多，使得溶酶體酶β-半乳糖苷酶的活性升高，故可以X-Gal作為底物對(duì)細(xì)胞衰老的情況進(jìn)行檢測(cè)。 細(xì)胞衰老檢測(cè)方法與步驟 （1）細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細(xì)胞片，每孔加入1×10E5個(gè)細(xì)胞，37℃ 5% CO2條件下培養(yǎng)過(guò)夜，使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長(zhǎng)。 （2）在超凈工作臺(tái)中吸棄6孔培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液，加入×1 PBS，洗滌細(xì)胞1次，隨后加入2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，室溫條件下固定3~5分鐘。 （3）吸棄2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入×1 PBS，洗滌細(xì)胞3次，每次3分鐘。 （4）吸棄×1 PBS，加X-Gal溶液以浸沒細(xì)胞片為宜，37℃孵育4~8小時(shí)或過(guò)夜，用保鮮膜包被6孔培養(yǎng)板以防染液蒸發(fā)。 （5）取出細(xì)胞爬片，去離子水沖洗2次，再次用固定液固定4分鐘，流水輕輕沖洗。 （6）將細(xì)胞爬片按此順序脫水、透明∶95%酒精I(xiàn)（2分鐘）→95%酒精Ⅱ（2分鐘）→100%酒精I(xiàn)（2分鐘）→100%酒精I(xiàn)（5分鐘）→二甲苯I（2分鐘）→二甲苯Ⅱ（2分鐘）。 （7）中性樹膠封片。 （8）在普通光學(xué)顯微鏡下觀察衰老細(xì)胞形態(tài)。 每張片子鏡下計(jì)數(shù)400個(gè)細(xì)胞，確定X-Gal染色陽(yáng)性細(xì)胞（衰老細(xì)胞）在細(xì)胞群體中的所占的百分比即衰老細(xì)胞率（藍(lán)染細(xì)胞數(shù)/總計(jì)細(xì)胞數(shù)×100%）。 細(xì)胞衰老檢測(cè)注意事項(xiàng) ①X-Gal溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配。 ②細(xì)胞固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或固定之后清洗不干凈，均會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
085600 材料與化工 298
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
304分材料專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
材料工程269求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
0703化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
學(xué)碩材料275調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
化學(xué) 0703求調(diào)劑 總分293 一志愿211
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
264求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
266求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 北京艾柏森 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計(jì)算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報(bào)考 +8 | pin8023 2026-02-28 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[基金申請(qǐng)]
 成果系統(tǒng)訪問(wèn)量大，請(qǐng)15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請(qǐng)諒解。
+9
|
xhuama 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 276求調(diào)劑 +8 | 路lyh123 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)化學(xué)314分求調(diào)劑 +5 | lr1212.. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科大能動(dòng)297求調(diào)劑，本科川大 +3 | 邵11 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 267求調(diào)劑 +6 | 釣魚佬as 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | kkcoco25 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)材料與化工281求調(diào)劑，有科研和獲獎(jiǎng)經(jīng)歷 +6 | wsxw 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7 | 11ing 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料284求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)英一數(shù)二專碩 +15 | 想上岸的土撥鼠 2026-02-28 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 306分材料調(diào)劑 +5 | chuanzhu川燭 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 誠(chéng)招農(nóng)業(yè)博士 +3 | 心欣向榮 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328求調(diào)劑 +3 | 。，。，。，。i 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 成果系統(tǒng)訪問(wèn)量大，請(qǐng)一小時(shí)后再嘗試。---NSFC啥時(shí)候好哦，已經(jīng)兩天這樣了 +4 | NSFC2026我來(lái)了 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +9 | 南迦720 2026-02-28 | 10/500 |
|
|
|
[論文投稿]
求助coordination chemistry reviews 的寫作模板
 10+3
|
ljplijiapeng 2026-02-27 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿]
Optics letters投稿被拒求助
30+3
|
luckyry 2026-02-26 | 4/200 |
|