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happygjx木蟲 (小有名氣)
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[求助]
酵母雙雜交篩庫問題 已有1人參與
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我篩了兩次cDNA文庫，誘餌和文庫菌雜交完涂DDO/X－a-gal／AbA的150mm的大板子，第一次為了省點板子，菌液用3ml 0.5xYPDA重懸雜交菌沉淀，沒有進行稀釋，直接涂了20個大板每個200ul，一周過去了啥也看不出來。感覺很濃，背景一片灰，有的一片藍，沒法挑單克隆啊。 第二次做按著說明書用10ml 0.5xYPDA重懸雜交菌沉淀，涂了60個大板每個200ul， 第三天還是啥也看不出來，感覺還是很濃。而10倍稀釋后涂了DDO對照板子，第二天就能看出好多單菌落。 有沒有大佬做過，求指教。是這個篩選策略有問題還是涂得問題啊？要稀釋多少倍涂嗎？ |
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2樓2021-10-11 09:17:23
宇智波斑5547
新蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 細胞衰老
3樓2022-01-04 09:31:41
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