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北京艾柏森鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染那些事兒
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染對(duì)初接觸細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的科研人員而言，是一道難過(guò)的坎兒，細(xì)胞轉(zhuǎn)染率低的話，你珍貴的細(xì)胞可能就只能扔掉了。 一、轉(zhuǎn)染的途徑大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類(lèi)： 1.物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例。 2.化學(xué)介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。 3.生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。 理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前轉(zhuǎn)染效率zui高的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是，病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對(duì)細(xì)胞類(lèi)型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特點(diǎn)。 需要指出的一點(diǎn)，無(wú)論采用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù)，要獲得最優(yōu)的轉(zhuǎn)染結(jié)果，可能都需要對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染效率的因素很多，從細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)，都需要考慮。 二、常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)： 1.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（transient transfection）：外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24~72h小時(shí)內(nèi)（依賴(lài)于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)和熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測(cè)。 2.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：外源DNA既可以整合到宿主細(xì)胞中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過(guò)一些選擇性標(biāo)記。如來(lái)氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的比較 三、轉(zhuǎn)染方式 細(xì)胞由帶負(fù)電荷的磷脂雙分子層構(gòu)成，這對(duì)大分子物質(zhì)來(lái)說(shuō)是個(gè)不可透過(guò)的屏障，比如DNA和RNA的磷酸骨架，其也帶負(fù)電荷。為了使核酸穿過(guò)細(xì)胞膜，研究人員開(kāi)發(fā)了多種技術(shù)，大致分為三類(lèi)：化學(xué)方法---利用載體分子包被核酸使其呈現(xiàn)中性電荷或正電荷。生物方法---利用基因工程病毒轉(zhuǎn)染非病毒基因到細(xì)胞中。物理方法---在細(xì)胞膜表面產(chǎn)生一個(gè)瞬時(shí)的孔從而導(dǎo)入DNA。然而，沒(méi)有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的方法應(yīng)根據(jù)您的細(xì)胞類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇，理想的方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響最小，并且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。 艾柏森提供細(xì)胞轉(zhuǎn)染熒光蛋白實(shí)驗(yàn) 艾柏森服務(wù)優(yōu)勢(shì) 艾柏森生物科技有限公司致力于基因、重組蛋白、抗體、噬菌體文庫(kù)等生物制劑的研發(fā)，并致力于為客戶(hù)提供一站式的CRO技術(shù)服務(wù)。 公司成立至今，以自主研發(fā)為核心，圍繞大量專(zhuān)業(yè)技術(shù)人才，先后搭建了蛋白表達(dá)純化平臺(tái)、抗體定制平臺(tái)、抗體工程平臺(tái)、抗體藥物平臺(tái)、質(zhì)量分析平臺(tái)以及模式動(dòng)物基因工程研究平臺(tái)。以抗體藥物研發(fā)一條鏈解決方案為基礎(chǔ)，我們主要為客戶(hù)提供重組蛋白表達(dá)生產(chǎn)、抗體制備、噬菌體庫(kù)構(gòu)建與篩選，單克隆抗體藥物開(kāi)發(fā)（抗體篩選、抗體測(cè)序、抗體分析、抗體人源化與親和力成熟、表位作圖、抗體工程改造與抗體藥效學(xué)）、穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建與cGMP生產(chǎn)、細(xì)胞免疫(CAR-T/CAR-NK）、蛋白晶體學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)、藥理毒理學(xué)等技術(shù)服務(wù)。 |
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