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473212012新蟲 (初入文壇)
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[求助]
異源表達(dá)抗菌蛋白
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通過雙酶切,T4酶連的方式,將我的1300多bp的目的片段連上了pet-28a,構(gòu)建大腸桿菌(BL21)構(gòu)建重組菌,異源表達(dá)大概45kda的抗菌蛋白,然后去跑sds-page發(fā)現(xiàn)雜帶很少,過鎳柱也發(fā)現(xiàn)流穿前的破碎上清,蠻干凈的,而且用低濃度20,40,60到400的咪?去洗脫,沒能洗下來,還有一個現(xiàn)象就是種子液加1%到液體發(fā)酵,發(fā)現(xiàn)大腸桿菌長得很慢,3小時了菌液都不是很混濁,OD600測了一下在0.2~0.3,就感覺被抑制了。大家是否有碰到這樣的現(xiàn)象呢,幫幫我吧,糾結(jié)兩三個月了!圖中從第2泳道起分別是流穿,20,40,60,80,100,200,400梯度洗脫。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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剛錄用,沒有期刊號,但是在線可看的論文可以放為代表作嗎
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