 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1142 | 回復(fù): 0 | |||
北京艾柏森鐵蟲 (小有名氣)
|
[交流]
質(zhì)粒提取鑒定及保存
|
|
（1） 質(zhì)粒的提取 (Tiangen質(zhì)粒提取試劑盒)： a） 挑菌： 選取培養(yǎng)板中大小中等的單個菌落， 消毒牙簽接種到10ml搖菌管中， 其中含有卡那霉素的LB約5ml， 37 °C， 220rpm恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)過夜。 b） 取上述2.0ml培養(yǎng)液， 于常溫下12000 rpm離心1分鐘， 棄上清， 干燥沉淀。 c） 加入250μl溶液P1(配有去RNA酶， 4 °C保存)， 渦旋振蕩， 完全懸浮細(xì)菌，不能留有沉淀， 否則會影響裂解。 d） 加入250μl溶液P2， 快速上下顛倒8次， 常溫靜置3分鐘， 可見混合液逐漸變清、 粘稠， 表示已充分裂解。 e） 再加入350 μl溶液Ⅲ， 快速上下顛倒8次， 可見白色絮狀物出現(xiàn)。 f） 常溫12000rpm離心10分鐘， 所得上清液倒入已經(jīng)用BL平衡過的過濾柱中，注意不要倒入白色絮狀物沉淀， 靜置3分鐘， 12000 rpm離心1分鐘。 g） 加入500 μl溶液PD， 12000 rpm離心1分鐘。 h） 加入600 μl溶液PW， 12000 rpm離心1分鐘； 此步驟再重復(fù)1次； 棄廢液后空管再次12000 rpm離心2分鐘。 i） 于超凈臺通風(fēng)干燥， 放置2-5分鐘， 加入33μl已加熱至65 °C的已滅菌的ddH 2 O， 室溫靜置3分鐘， 12000 rpm離心2分鐘， 得到相關(guān)質(zhì)粒DNA， 測濃度， -20 °C保存?zhèn)溆谩?br /> （2） 質(zhì)粒鑒定及保存 取100ng上述提取的質(zhì)粒， 進(jìn)行酶切（反應(yīng)體系見前）， 隨后用0.8%瓊脂糖凝膠電泳以鑒定（方法同前所述）， 最后將粗略鑒定正確的樣本送至生物技術(shù)公司測序。 如測序正確， 用50%滅菌甘油300μl+700μl的菌液， 標(biāo)記于-80 °C保存?zhèn)溆谩?br /> 11） 質(zhì)粒或PCR產(chǎn)物純化（膠回收） （1） 瓊脂糖電泳酶切或 PCR 相關(guān)產(chǎn)物。 （2） 在紫外投射反射儀割取含有目的片段的瓊脂糖凝膠片段， 割取要迅速， 以避免紫外線對 DNA 的損傷， 但注意盡量割取目的片段， 減少無目的片段的凝膠量， 以便提高純化回收效率。 （3） 用天平稱先稱區(qū)空 EP 管重量， 再稱取含有凝膠的 EP 管重量， 計算得到凝膠重量（mg）， 加入等量體積（μl） Bindingbuffer（如 1 mg=1 μl）。 （4） 將含有凝膠的 EP 管置入 60 °C 恒溫水浴箱中融化凝膠， 持續(xù) 8-10min，間或拿出搖勻， 以確保完全凝膠溶解。 （5） 將上述凝膠溶液轉(zhuǎn)移至干凈的純化柱上， 室溫下靜置吸附 3 分鐘。 （6） 將純化柱 12000rpm 離心 1 分鐘， 棄超濾液， 必要時可將超濾液重新離心1 次可提供純化效率； 再次加入 100μl Binding buffer， 12000rpm 離心 1 分鐘。 （7）加入 700μl Wash buffer （事先已經(jīng)加入無水乙醇）， 12000 rpm 離心 1 分鐘，棄超濾液； 空管 12000 rpm 離心 2 分鐘。 （8） 純化柱置于 1.5 毫升干凈離心管中， 于超凈臺通風(fēng)干燥 5 分鐘。 （9） 加入 30μl 已加熱至 65 °C 的已滅菌的 ddH 2 O， 室溫靜置 3 分鐘， 12000 rpm離心 2 分鐘， 得到相應(yīng)的 DNA 片段， 測濃度， -20 °C 保存?zhèn)溆谩?br /> 艾柏森提供質(zhì)粒測序服務(wù) 艾柏森服務(wù)優(yōu)勢 艾柏森生物科技有限公司致力于基因、重組蛋白、抗體、噬菌體文庫等生物制劑的研發(fā)，并致力于為客戶提供一站式的CRO技術(shù)服務(wù)。 公司成立至今，以自主研發(fā)為核心，圍繞大量專業(yè)技術(shù)人才，先后搭建了蛋白表達(dá)純化平臺、抗體定制平臺、抗體工程平臺、抗體藥物平臺、質(zhì)量分析平臺以及模式動物基因工程研究平臺。以抗體藥物研發(fā)一條鏈解決方案為基礎(chǔ)，我們主要為客戶提供重組蛋白表達(dá)生產(chǎn)、抗體制備、噬菌體庫構(gòu)建與篩選，單克隆抗體藥物開發(fā)（抗體篩選、抗體測序、抗體分析、抗體人源化與親和力成熟、表位作圖、抗體工程改造與抗體藥效學(xué)）、穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建與cGMP生產(chǎn)、細(xì)胞免疫(CAR-T/CAR-NK）、蛋白晶體學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)、藥理毒理學(xué)等技術(shù)服務(wù)。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
求調(diào)劑，不管什么專業(yè)，我是可塑造的人才一枚，希望遇到知己老師撈撈我
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
298求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
新疆大學(xué)地質(zhì)與礦業(yè)工程學(xué)院招生
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
材料325求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
0307化學(xué)求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
070300化學(xué)求調(diào)劑292分
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿中國石油大學(xué)（華東） 本科齊魯工業(yè)大學(xué) 求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
成果系統(tǒng)訪問量大，請15分鐘后再嘗試。由此給您造成的不便，敬請諒解。
已經(jīng)有19人回復(fù)
-
A區(qū)一本交叉課題組，低分調(diào)劑，招收機械電子信息通信等交叉方向
已經(jīng)有52人回復(fù)
-
085701環(huán)境工程317分求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 北京艾柏森 的主題更新
| 1 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
材料325求調(diào)劑
 30+6
|
mariusuki 2026-03-02 | 12/600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料專碩323求調(diào)劑 +5 | 李白26 2026-03-07 | 5/250 |
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 280分 +13 | yyqqhh 2026-03-03 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +4 | 劉合華 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600，一志愿鄭州大學(xué)，280分求調(diào)劑 +7 | Wuqi725 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +6 | Trying] 2026-03-05 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | 曼殊2266 2026-03-05 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 紡織、生物、化學(xué)、材料等專業(yè) +3 | Eember. 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué) 學(xué)碩 理工科均可 不區(qū)分研究方向 總分279求調(diào)劑 +7 | 1一11 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +8 | 26調(diào)劑 2026-03-03 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程學(xué)碩288求助調(diào)劑 +7 | 多吃億口芝士 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 0703 總分319求調(diào)劑 +4 | Xinyuu 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +8 | chenhanheng 2026-03-02 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化工270求調(diào)劑 +10 | 什么名字qwq 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 26考研報考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料工程求調(diào)劑 +3 | 1431251 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 清華大學(xué) 材料與化工 353分求調(diào)劑 +5 | awaystay 2026-03-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +7 | 明遠(yuǎn)求學(xué) 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|