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北京艾柏森鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
T載體的作用以及克隆時(shí)為什么要用T載體？
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T載體又叫T質(zhì)粒載體，是指T4噬菌體DNA連接酶，作用是在有Mg2 、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經(jīng)酶切的zd載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。 DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有一種大腸桿菌DNA連接酶沒有的特性，即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來。 T4噬菌體DNA 連接酶催化DNA 連接反應(yīng)內(nèi)分為3 步：首先，T4 DNA 連接酶與輔因子ATP形成酶-ATP復(fù)合物；然后，酶-ATP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。連接反應(yīng)通常將兩個(gè)不同大小的片斷相連。 形象的說，DNA水解酶相當(dāng)于剪刀，剪斷DNA，而T載體容（DNA連接酶）就相當(dāng)于針線。如果克隆時(shí)不用，就不能將DNA連接起來。 T載體是聚合酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物的克隆運(yùn)載體，線性化后兩側(cè)3′端各多出一個(gè)脫氧胸苷酸(T)。由于PCR產(chǎn)物兩側(cè)3′端通常含單個(gè)脫氧腺苷酸(A)，與T載體之間的A-T互補(bǔ)性可提高PCR產(chǎn)物克隆的效率。 |
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