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MDL888新蟲 (初入文壇)
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2種細胞集落形成實驗
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細胞集落形成實驗是檢測培養(yǎng)細胞增殖能力的有效方法之一,通過計算集落形成率(colony forming efficiency),來測定測試細胞的增殖能力。 實驗前準備:6孔板、吸管、槍頭、血球計數(shù)板、基質(zhì)膠等放入超凈工作臺消毒30min。 1、平板集落形成實驗(適用于貼壁細胞) ①取出貼壁率>90%的細胞(處于對數(shù)生長期),消化離心,重懸細胞并進行細胞計數(shù)。 ②6孔板種板:實驗分組,每個孔中加入1000個細胞,放入co2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 ③培養(yǎng)1周后,當肉眼可見集落形成時,取出6孔板,棄除培養(yǎng)液,每孔加入2ml甲醇固定30min,棄除甲醇,每孔加入2ml0.1%結(jié)晶紫染色3min,然后清洗掉結(jié)晶紫,數(shù)碼相機拍照,光鏡下計數(shù)集落 2、軟瓊脂集落形成實驗(適用于懸浮細胞) 1.收集對數(shù)生長期的細胞進行活細胞計數(shù),然后調(diào)整細胞濃度,用含20%fbs的dmem制成1000活細胞/ml的細胞懸液。 2.用蒸餾水制備1.2%、0.7%兩個濃度的低熔點瓊脂糖,高壓滅菌后,維持在40℃不會凝固; 3.1.2%瓊脂糖和2xdmem等體積混合,6孔板中加入1.4ml,rt凝固作為底層瓊脂,置co2溫箱中備用; 4.0.7%瓊脂糖和2xdmem等體積混合,再加入細胞懸液充分混勻,rt凝固作為上層瓊脂,勿有氣泡,將實驗組和對照組分兩組加好,蓋上蓋并作好標記。在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。 5.然后移培養(yǎng)板或平皿于co2培養(yǎng)箱中37℃進行培養(yǎng)。 6.培養(yǎng)7～l0天,肉眼觀察并計數(shù)細胞集落。 結(jié)果判定: 以肉眼可見的細胞團作為計數(shù)集落的標準。集落的計數(shù)和計算:集落數(shù)=n孔中細胞集落數(shù)總和/n孔, 集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細胞總數(shù)×100% [ Last edited by 小冀- on 2021-8-24 at 13:20 ] |
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