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醫(yī)學(xué)生物科研銅蟲 (小有名氣)
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剛果紅染色實(shí)驗(yàn)，鑒別淀粉樣變及分型其他染色無(wú)法比擬 -北京白奧思科生物分享
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淀粉樣物質(zhì)是一種無(wú)固定形狀的細(xì)胞外嗜酸性物質(zhì)，可存在于不同的組織、器官，導(dǎo)致的疾病稱為淀粉樣變。 淀粉樣蛋白沉積于組織或器官引起的慢性代謝性疾病，可侵犯全身多種器官，也可僅局限于皮膚。 淀粉樣物質(zhì)主要是由蛋白質(zhì)構(gòu)成，該蛋白大部分排列成反向的β-折疊層結(jié)構(gòu)。在電子顯微鏡下淀粉樣物質(zhì)呈原纖維排列，病例材料中為大量細(xì)胞外的不分支的細(xì)絲，大多隨機(jī)排列。此類蛋白質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)類似淀粉，實(shí)際與淀粉無(wú)關(guān)。 通常無(wú)法用已知病因解釋時(shí)可用活體組織檢查為依據(jù)，用于識(shí)別淀粉樣物質(zhì)的組織學(xué)方法有甲紫染色、剛果紅染色、偏振光顯微鏡觀察等。 目前研究發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的甲紫染色法靈敏度低、特異性差，經(jīng)典的而且有效的方法是剛果紅染色，1922年Bennhold發(fā)現(xiàn)了剛果紅可以用于活體內(nèi)淀粉樣物質(zhì)的鑒別，并應(yīng)用到組織切片。 01 試劑配制 甲醇剛果紅染液: 剛果紅 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml 堿性乙醇分化液: 氫氧化鉀 0.2 g 80%乙醇 100 ml 02 染色步驟 （1）切片脫蠟至水（和常規(guī)染色處理方法一致） （2）甲醇剛果紅染液染10～20分鐘 （3）用堿性乙醇分化液分化數(shù)秒，水洗 （4）蘇木素復(fù)染2分鐘，水洗 （5）脫水，透明，封固 03 結(jié)果 淀粉樣物呈桔紅色。 04 類淀粉染色的應(yīng)用 確定淀粉樣變性及玻璃樣變性的膠原組織，后者在剛果紅法染色后呈淡桔色，常用于診斷甲狀腺髓樣癌和胰島細(xì)胞瘤等。 05 注意事項(xiàng) （1）切片脫蠟應(yīng)盡量干凈，否則影響染色效果。 （2）剛果紅染色液染色時(shí)盡量采用浸染，如果滴染，應(yīng)置于濕盒防止溶液揮發(fā)。 （3）分化時(shí)間較短，膠原纖維也被染成紅色；分化過(guò)度，淀粉樣物質(zhì)也被脫色。如果脫色過(guò)度，可以將切片清洗后重新用剛果紅染色液浸染。 |
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