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病毒血清學(xué)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法
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首先，你得知道什么是病毒血清學(xué)檢測(cè) 按照百度百科的解釋，病毒血清學(xué)檢測(cè)是利用抗原與抗體的特異性反應(yīng)檢測(cè)病毒及其抗體的血清學(xué)技術(shù)。 包括中和實(shí)驗(yàn)、紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、蛋白檢測(cè)以及發(fā)光物質(zhì)和熒光素標(biāo)記的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( ELISA)等方法。近年來(lái)，免疫組化、免疫共沉淀、免疫轉(zhuǎn)印等技術(shù)在臨床也有了更多的運(yùn)用，為病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)提供了基礎(chǔ)。 血清學(xué)檢測(cè) 沒(méi)錯(cuò)，大家可能會(huì)想到打亂市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)，及犧牲很多人性命的—新冠病毒。2019年冠狀病毒�。–OVID-19）正在影響整個(gè)全球市場(chǎng)，除了人的生命成本外，病毒傳播對(duì)全球經(jīng)濟(jì)產(chǎn)生了巨大的影響，同時(shí)也對(duì)世界技術(shù)供應(yīng)鏈產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。 由于目前COVID-19的診斷主要依靠血清學(xué)檢測(cè)和核酸檢測(cè)，而血清學(xué)檢測(cè)由于其簡(jiǎn)便快捷的檢測(cè)方法，能夠很好的滿足如此大批量的檢測(cè)需求。 一、血清樣本采集 在病程早期采集急性期血清，間隔2～3周后采集恢復(fù)期血清，有的病毒抗體出現(xiàn)早，應(yīng)間隔1周左右采集第2份血清，以便早期診斷。采血前建議患者清淡飲食，盡量空腹。 二、進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)的必要性 與聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）或病原菌培養(yǎng)檢測(cè)方法相比，血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果對(duì)疾病的感染過(guò)程提供了不同的見(jiàn)解。血清學(xué)檢測(cè)可以確定人群中已被感染并產(chǎn)生相應(yīng)抗體的“無(wú)癥狀感染者”以及感染后通過(guò)自身免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體達(dá)到自愈的人群，基于檢測(cè)樣本中抗體的血清學(xué)檢測(cè)可以快速，經(jīng)濟(jì)，高效，直觀地提供結(jié)果。 三、病毒血清學(xué)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)方法 1.病毒中和實(shí)驗(yàn) 是指病毒在活體內(nèi)或細(xì)胞培養(yǎng)中被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗(yàn)。可用來(lái)檢查患病后或人工免疫后機(jī)體血清中抗體的增長(zhǎng)情況，也可用來(lái)鑒定病毒或研究其抗原結(jié)構(gòu)。病毒中和實(shí)驗(yàn)可以在細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或動(dòng)物上進(jìn)行，一般將抗體做稀釋，與一定量的病毒混合，然后檢測(cè)其在細(xì)胞培養(yǎng)、雞胚或動(dòng)物上的感染性。終點(diǎn)是以抑制細(xì)胞病變（細(xì)胞培養(yǎng)）或病毒復(fù)制（雞胚或動(dòng)物）的抗體最高稀釋度來(lái)表示。中和抗體特異性高，維持時(shí)間較長(zhǎng)，流行病學(xué)研究常用此法。 2.紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn) 部分病毒如流感等表面有血凝素（糖蛋白），在一定條件下，能與雞、豚鼠紅細(xì)胞表面的糖蛋白受體結(jié)合而發(fā)生凝集現(xiàn)象。滴定病毒的血凝效價(jià)，便可大致估計(jì)病毒顆粒的數(shù)量（1個(gè)血凝單位=106病毒顆粒）。若血清中出現(xiàn)特異性抗體與相應(yīng)病毒結(jié)合后，使病毒失去凝集紅細(xì)胞的能力，從而抑制血凝現(xiàn)象的出現(xiàn)，則稱為血凝抑制現(xiàn)象。利用血凝抑制實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)和鑒定具有血凝特性的病毒，如流感病毒、乙腦病毒的輔助診斷和流行病學(xué)調(diào)查。該方法敏感、簡(jiǎn)單、費(fèi)用低，而且操作簡(jiǎn)便。同時(shí)，也可用于抗體效價(jià)檢測(cè)。 3.補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 用免疫溶血機(jī)制做指示系統(tǒng)，來(lái)檢測(cè)另一反應(yīng)系統(tǒng)抗原或抗體的試驗(yàn)，可以用于檢測(cè)動(dòng)物血清中的病毒抗體，病毒抗原與抗體的相互反應(yīng)可以引起補(bǔ)體結(jié)合，最終可導(dǎo)致膜溶解。在補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，如果反應(yīng)系統(tǒng)中存在待測(cè)的抗體（或抗原），則抗原抗體發(fā)生反應(yīng)后可結(jié)合補(bǔ)體；再加入指示系統(tǒng)時(shí)，由于反應(yīng)液中已沒(méi)有游離的補(bǔ)體而不出現(xiàn)溶血，是為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陽(yáng)性。如果反應(yīng)系統(tǒng)中不存在的待檢的抗體（或抗原），則在液體中仍有游離的補(bǔ)體存在，當(dāng)加入指示系統(tǒng)時(shí)會(huì)出現(xiàn)溶血，是為補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)陰性。因此補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)可用已知抗原來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗體，或用已知抗體來(lái)檢測(cè)相應(yīng)抗原。 4.沉淀實(shí)驗(yàn) 可溶性抗原（如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織滲出液等）與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適當(dāng)量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的白色沉淀。目前臨床運(yùn)用較少。 5.凝集實(shí)驗(yàn) 顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后發(fā)生凝集的血清學(xué)試驗(yàn)�？乖c抗體復(fù)合物在電解質(zhì)作用下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間，形成肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)塊。臨床常用于鑒定菌種和梅毒感染的確認(rèn)。 6.病毒蛋白檢測(cè) 病毒侵入宿主細(xì)胞后可合成自身結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白，也可與宿主細(xì)胞發(fā)生相互作用而上調(diào)或下調(diào)宿主蛋白的表達(dá)，除直接檢測(cè)病毒外，也可檢測(cè)與病毒發(fā)生作用的蛋白。在檢測(cè)分類上可根據(jù)檢測(cè)對(duì)象分為抗原檢測(cè)和抗體檢測(cè)，也可根據(jù)檢測(cè)方法分為定性檢測(cè)和定量檢測(cè)，根據(jù)標(biāo)記物結(jié)合于抗體還是抗原分為直接檢測(cè)和間接檢測(cè)。臨床常用病毒蛋白的檢測(cè)方法包括ELISA技術(shù)、免疫印跡技術(shù)等，均可用標(biāo)記有酶、發(fā)光底物或熒光素的抗體或抗原檢測(cè)病毒抗原或針對(duì)病毒產(chǎn)生的抗體。 免疫酶染色技術(shù)包含直接免疫染色和間接免疫染色方法，直接免疫染色法利用熒光素或酶標(biāo)記，可識(shí)別病毒抗原的特異性抗體與感染細(xì)胞或組織樣本作用，而間接免疫染色法是利用熒光素或酶標(biāo)記抗抗體，用病毒特異性抗體與感染細(xì)胞或組織樣本作用后，再加入熒光素或酶標(biāo)記的抵抗抗體作用。間接法較直接法敏感，而且使用方便，可用于多種病毒抗原的檢測(cè)，不需要提純病毒的特異性抗體和繁瑣的標(biāo)記過(guò)程。 |
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