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北京艾柏森鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
如何利用多色流式細胞術篩選抗體分泌B細胞
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B細胞對抗原的免疫應答有兩種情況：一種是胸腺非依賴性抗原（thymus-independent antigen，TI抗原），大多為多糖類和脂類抗原，不需要T細胞的輔助，就可直接激活B細胞產(chǎn)生IgM類抗體，主要由B1細胞介導，其抗原受體多樣性有限，特異性差；另一種是胸腺依賴性抗原（thymus-dependent antigen，TD抗原），為蛋白類抗原，主要由B2細胞介導，激活B細胞發(fā)生免疫應答需要T細胞的輔助，其間會經(jīng)歷抗體親和力成熟、類別轉換和記憶B細胞形成等過程。 所以在B細胞的分化過程主要可分為前B細胞（Pre-B cell）、不成熟B細胞(immature B cell)、成熟B細胞(mature B cell)、活化B細胞(activated B cell)和漿細胞(plasma cell)五個階段。其中前B細胞和不成熟B細胞的分化是胸腺非依賴性的，其分化過程在骨髓中進行。胸腺依賴階段是指成熟B細胞在抗原刺激后活化，在抗原提呈細胞和Th細胞的輔助下成為活化B細胞，進而分化為合成和分泌抗體的漿細胞，這個階段的分化主要是在外周免疫器官中進行的。 B細胞分化的各個階段可以通過評估不同的細胞表面標志物的表達和水平來確定，這些標志物的表達和水平在B細胞分化的整個過程中都受到調節(jié)。前B細胞胞漿中可檢測到IgM的重鏈u鏈，但無輕鏈，也無膜表面Ig的表達，因此缺乏對抗原的反應能力。末端脫氧核甘酸轉移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表達在前B細胞，進入非成熟B細胞后這兩種標志即消失，因此TdT和CD10對于區(qū)分前B細胞與B細胞其它發(fā)育階段非常有用。CD19、CD20和MHCI類抗原在此階段開始表達。前B細胞對抗原無應答能力；不成熟B細胞開始表達mIgM，但如與抗原結合，則產(chǎn)生負應答，使B細胞轉變?yōu)槭芤种茽顟B(tài)，不能繼續(xù)分化為成熟的B細胞，這是形成自身免疫耐受的機制之一，CD19、CD20和MHCI類抗原表達量增加，并可開始表達CD21抗原；骨髓中發(fā)育成熟B細胞經(jīng)血液遷移至外周淋巴器官，此時膜表面同時表達mIgM和mIgD，mIgD的表達防止了B細胞與抗原結合后所引起的免疫耐受；成熟B細胞接受抗原刺激后，在抗原提呈細胞和Th細胞的輔助下成為活化B細胞，進而分化為漿細胞，合成和分泌各類免疫球蛋白，同時獲得了PC-1等漿細胞特異性標志，而mIg，MHCI類抗原、CD19、CD20、CD21等標記消失。 由此可知，B細胞及其分化亞群可以根據(jù)細胞表面表達的不同標志物而區(qū)分。選擇這些結合了熒光的抗體直接標記這些標志物之后，就可以通過多色流式分析技術實現(xiàn)對抗體分泌B細胞的篩選。 |
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