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pinkzou新蟲 (初入文壇)
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想用biobrick（生物磚）快速構(gòu)建多拷貝，但構(gòu)不出來 已有1人參與
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我先在載體的目的基因的表達框上游加入了EcoR1、Xbal1位點，在下游加入了Spe1和Pst1位點，然后構(gòu)建了與含目的基因載體不同抗性的含EcoR1、Xbal1、Spe1和Pst1的空載體，選用biobrick的原因是不能做膠回收，因為目的基因與載體的其他部分片段大小相似，做不了膠回收，然后又想快速構(gòu)建多拷貝質(zhì)粒。。。。。但是嘗試了很多次，無法用biobrick構(gòu)建。以下是我的具體步驟，請大佬們看看我做的是不是有問題。首先用PCR擴增與目的基因載體不同抗性的載體將其稱為B（含目的基因的載體稱為A）然后將B的PCR產(chǎn)物做膠回收，然后用EcoE1和Pst1對膠回收產(chǎn)物酶切，用EcoR1和Spe1對A酶切，同時再配一個體系用Xbal1和Pst1對A酶切，然后再將三個酶切產(chǎn)物進行連接轉(zhuǎn)化，但是始終不能得到目的菌株。A載體和B載體如圖所示。新人，沒啥金幣，實在對不住啊 A B |
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pinkzou
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3樓2021-09-23 13:27:10
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5樓2022-07-22 10:25:22
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