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忘塵08新蟲 (初入文壇)
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[求助]
5mC的dot-blot結(jié)果一直出不來(lái)，條帶一篇黑，請(qǐng)問怎麼了
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最近在做DNA的5甲基胞嘧啶甲基化檢測(cè)，用到dot-blot試了幾次都出不來(lái)，不知道怎麼了，請(qǐng)大神指教。實(shí)驗(yàn)步驟。 （1）NC膜用水潤(rùn)濕。 （2）提取的DNA濃度約為100ng/ul，所以採(cǎi)用每次上樣1.5ul，一共分7次點(diǎn)到NC膜上，等上一個(gè)點(diǎn)乾了再原位點(diǎn)下一個(gè)。 （3）點(diǎn)完後紫外照射1h. （4）5%的TBST牛奶封閉2小時(shí)。 （5）TBST洗膜，5分鐘每次，洗2次。 （6）一抗孵過(guò)夜。 （7）TBST洗膜，5分鐘每次，洗2次。 （9）孵二抗1.5h。 （10）TBST洗膜，10分鐘每次，洗3次。 （11）洗完後AI800，加發(fā)光液後曝光。 從圖片上看，背景非常地黑，左側(cè)似乎能見到2個(gè)孔有黑色斑點(diǎn)。但是總體一篇模糊，請(qǐng)問應(yīng)該做才能做出好看條帶。 圖片1.png |
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