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LS-Cui新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
做快速核酸檢測(cè)需要知道的那些技術(shù)（三）
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今天繼續(xù)分享關(guān)于重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)的靈敏度，特異性以及其對(duì)模板要求等相關(guān)信息。 1、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)的靈敏度如何？ 特異性如何？ 重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)在理論上可實(shí)現(xiàn)對(duì)1個(gè)拷貝的檢測(cè)，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，其靈敏度不低于甚至高于PCR的靈敏度。重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)的引物長(zhǎng)度要求不低于30bp，比PCR引物長(zhǎng)度長(zhǎng)，特異性不低于PCR。 2、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)是否可實(shí)現(xiàn)多重?cái)U(kuò)增檢測(cè)？ 可以。重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過(guò)，多重的引物探針等需要精心設(shè)計(jì)，以便每個(gè)引物探針都?jí)蛴行У墓ぷ鳌?br /> 3、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)反應(yīng)單元的保質(zhì)期是多久？ 重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)反應(yīng)單元在4℃下可保存1個(gè)月左右；如果長(zhǎng)期保存，建議放置在-20℃下進(jìn)行保存，可保存半年以上。 4、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)反應(yīng)能對(duì)模板進(jìn)行定量么? 可以�？筛鶕�(jù)模板擴(kuò)增起峰的時(shí)間來(lái)進(jìn)行定量。具體來(lái)說(shuō)，起峰時(shí)間的快慢，依賴(lài)于反應(yīng)起始時(shí)的模板量。初始模板的拷貝越多，起峰時(shí)間就越快。 不過(guò)，這種定量需要精心的實(shí)驗(yàn)安排，確保反應(yīng)是同時(shí)開(kāi)始的。如可以利用鎂離子的添加時(shí)間進(jìn)行控制。鎂離子一旦進(jìn)入體系，重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)反應(yīng)就會(huì)開(kāi)始。此外，較慢的擴(kuò)增過(guò)程有助于更精確的定量，可以通過(guò)調(diào)整反應(yīng)條件或引物設(shè)計(jì)來(lái)減慢重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)的反應(yīng)速度。 5、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)對(duì)模板有什么具體的要求？ 重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)的模板無(wú)特殊的要求，可用于PCR的模板都可以用來(lái)進(jìn)行重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)擴(kuò)增，并且重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)比PCR更能忍受粗提取的模板。 |
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