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NanoFCMlxq新蟲 (正式寫手)
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[交流]
外泌體相關研究文獻分享,輕松讀完一篇文獻（二）
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今天分享一篇發(fā)表在Oncogene（2020年IF=7.971）上的文章，名為《BATF2 prevents glioblastoma multiforme progression by inhibiting recruitment of myeloid-derived suppressor cells》[1]（ BATF2通過抑制骨髓源性抑制細胞的募集來阻止膠質(zhì)母細胞瘤的多形性進展）。 膠質(zhì)母細胞瘤(Glioblastoma multiform, GBM)是人類原發(fā)性腦腫瘤中最常見、最致命的一種類型。GBM患者中位生存率<16個月。腫瘤微環(huán)境(位于內(nèi)外環(huán)境中的腫瘤細胞，TME)對腫瘤的發(fā)生、生長和進展至關重要。骨髓源性抑制細胞(MDSCs)是骨髓源性細胞的異質(zhì)群體，在各種病理條件下累積，特別是在膠質(zhì)瘤中。MDSCs釋放血管內(nèi)皮生長因子A ( VEGFA)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP2和MMP-9)促進膠質(zhì)瘤生長。明確腫瘤細胞與腫瘤微環(huán)境之間的相互作用是治療膠質(zhì)瘤的關鍵。重要的是，在微環(huán)境中靶向腫瘤相關的MDSCs是膠質(zhì)瘤的另一種治療策略。 細胞外囊泡(EVs)包括大小范圍約為40-160 nm的小細胞外囊泡(sEVs)，以及直徑在50 nm到1 μm之間的微粒、微囊泡和大囊泡。EVs是由核內(nèi)體和核外體以內(nèi)出芽和外出芽的形式形成的，同時有核酸和蛋白質(zhì)的包裹。已知腫瘤源EVs在腫瘤細胞與腫瘤微環(huán)境之間的通信中發(fā)揮關鍵作用。越來越多的研究表明，EVs與腫瘤微環(huán)境密切相關。EVs攜帶的腫瘤細胞的生物活性分子最終接觸并激活腫瘤促進細胞(如MDSCs和腫瘤相關巨噬細胞，TAMs)。EVs是反映腫瘤進展的有效循環(huán)標志物，在液體活檢領域發(fā)揮著重要作用。因此，近年來，血漿EVs (plEVs)被鑒定為能夠診斷膠質(zhì)瘤和其他癌癥類型的循環(huán)生物標志物。 堿性亮氨酸拉鏈ATF樣轉錄因子2 (Basic leucine zipper ATF-like transcription factor 2, BATF2)，也被稱為干擾素調(diào)節(jié)的AP-1抑制因子(suppressor of AP-1 regulated by interferon (SARI))，通過抑制AP-1結合來降低CCN1啟動子活性。最近有研究報道，BATF2過表達可抑制腫瘤細胞增殖和轉移，并促進各種腫瘤細胞的凋亡。在患者中，BATF2表達缺失可通過激活肝細胞生長因子/c-Met信號促進上皮-間充質(zhì)轉化。由DNA甲基轉移酶抑制劑和BATF2組成的潛在免疫治療組合對成神經(jīng)管細胞瘤發(fā)揮抗腫瘤作用。此外，BATF2上調(diào)TAMs中的IL-12p40，誘導CD8+T細胞活化，從而影響CD8α+樹突狀細胞發(fā)育和B淋巴瘤細胞殺傷。本小組之前的研究表明，BATF2以銅藍蛋白為靶點抑制缺氧誘導因子(HIF-1α)，從而抑制結腸腫瘤的生長。然而，BATF2在膠質(zhì)瘤生長和腫瘤微環(huán)境中的作用尚未完全了解。 本研究發(fā)現(xiàn)BATF2通過抑制MDSCs的募集來抑制GBM的生長，而BATF2過表達細胞系的EVs在體外抑制MDSCs的募集。此外，24對不同分期膠質(zhì)瘤血漿的EVs檢測表明，血漿BATF2+ EVs可區(qū)分III-IV期膠質(zhì)瘤、I-II期膠質(zhì)瘤和健康供體。值得注意的是，我們的新發(fā)現(xiàn)確立了BATF2和BATF2-EVs在調(diào)節(jié)MDSCs中的調(diào)節(jié)功能，并提出了BATF2+plEVs作為反映膠質(zhì)瘤分期的生物標志物的潛力。 研究結果： 一、 BATF2過表達抑制GBM成瘤 為了闡明BATF2在膠質(zhì)瘤形成中的功能聯(lián)系，我們選擇GBM細胞在BALB/c裸鼠顱內(nèi)進行腫瘤發(fā)生試驗。我們檢測了人星形膠質(zhì)細胞(HA1800)和5種不同的膠質(zhì)瘤細胞系(U251、U87-MG、LN-18、U118-MG和A172)的mRNA和蛋白水平上的BATF2表達。結果顯示，在U251細胞中BATF2的表達降低，而在U87-MG細胞中BATF2的表達升高。因此，我們用含空載體(LV-Ctrl)或人BATF2編碼載體(LV-BATF2)的慢病毒感染U251細胞。此外，我們還用兩種針對BATF2的慢病毒編碼shRNA (sh-1068和sh-554)或對照shRNA (sh-NC)感染U87-MG細胞。通過western blotting和qPCR分析證實了病毒轉導后BATF2的表達。接下來，我們在裸鼠前腦原位植入1 × 10^5 U251-Ctrl和U251-BATF2細胞，并進行MRI和micro-CT檢測以評估初始腫瘤生長情況。腫瘤植入5周后，我們發(fā)現(xiàn)在U251細胞中過表達BATF2顯著抑制了腫瘤生長。在終點測量腫瘤體積(n=5) (p< 0.001)。此外，皮下注射U251-Ctrl和U251-BATF2細胞顯示，BATF2上調(diào)顯著降低腫瘤體積和重量~64.8% (p< 0.01)。對U87-shBATF2下調(diào)的異種移植物的MRI掃描和H&E染色顯示，當BATF2下調(diào)時，腫瘤腫塊顯著增加(紅色虛線顯示腫瘤區(qū)域)。腫瘤體積和重量統(tǒng)計數(shù)據(jù)證實了相同的結果(p< 0.001)。這些數(shù)據(jù)證實了BATF2抑制顱內(nèi)和皮下GBM模型中的腫瘤生長。 圖1 BATF2過表達抑制GBM成瘤。A. U251-Ctrl組和U251-BATF2組典型腫瘤，MRI圖像(35天)，3D-Micro-CT圖像(35天)，H&E(35天)。紅色點狀區(qū)域突出腫瘤區(qū)域�；鶞食�，100μm。B. 平均顱內(nèi)腫瘤體積 (n= 5， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。C. U251-Ctrl和U251-BATF2的平均皮下腫瘤體積 (n= 5， *p< 0.05， **p < 0.01， ***p < 0.001)。D. U251-Ctrl和U251BATF2的平均皮下腫瘤重量(n =5， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。 E. U87-sh-NC、U87-sh-554、U87-sh-1068組典型腫瘤, MRI、3D-micro-CT、H&E圖像。紅色點狀區(qū)域突出腫瘤區(qū)域�；鶞食撸�100μm。F. 平均顱內(nèi)腫瘤體積 (n= 5， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。G. U87-sh-NC、U87-sh-554和U87-sh-1068的平均腫瘤體積(n =6， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。H. U87-sh-NC、U87-sh-554和U87-sh-1068的平均腫瘤重量(n= 6， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。 二、 BATF2抑制單核細胞來源的MDSCs向腫瘤微環(huán)境的募集 接下來，我們研究了BATF2是如何抑制腫瘤生長的。有趣的是，Cell Counting Kit-8分析顯示，在U251、U87-MG、U118-MG和A172膠質(zhì)瘤細胞中，BATF2的過表達和下調(diào)均不影響體外細胞活力。此外，體外transwell遷移實驗顯示，BATF2不影響腫瘤細胞的侵襲和遷移。此外，腫瘤皮下組織增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組化(IHC)染色顯示，BATF2表達上調(diào)并不能抑制腫瘤細胞增殖。U87-sh-554、U87-sh-1068和U87-sh-NC組的PCNA免疫組化染色證實了上述結果。因此，我們假設BATF2可能不是直接調(diào)控膠質(zhì)瘤細胞增殖，而是影響腫瘤微環(huán)境。在此，我們利用小鼠膠質(zhì)瘤細胞系GL261和穩(wěn)定細胞系GL261-BATF2建立膠質(zhì)瘤模型，發(fā)現(xiàn)BATF2過表達抑制GL261皮下腫瘤生長，與預期一致。通過計算骨髓源性細胞(CD45+，主要包括MDSCs和巨噬細胞)募集到腫瘤中的百分比，我們發(fā)現(xiàn)BATF2的上調(diào)顯著抑制了CD45+細胞浸潤(p< 0.001)。 此外，我們觀察到，與GL261-Ctrl相比，GL261-BATF2中CD45+細胞上Gr-1+CD11b+MDSCs門內(nèi)百分比顯著降低(p< 0.05)。然而，F(xiàn)480+CD11b+ tam無明顯變化。我們進一步使用單核細胞標記物(Ly-6C)和粒細胞標記物(Ly-6G)對MDSCs進行染色(數(shù)據(jù)未顯示)，結果發(fā)現(xiàn)，與U251-Ctrl 相比， BATF2的上調(diào)導致人膠質(zhì)瘤細胞系U251-BATF2中的ly-6c+ Gr-1+ 單核細胞-MDSCs (Mo-MDSCs)和MDSCs募集顯著減少(p< 0.001)。此外，與U87-sh-NC相比，U87-sh-554和U87-sh-1068組的Mo-MDSCs和MDSCs募集到腫瘤組織中的數(shù)量顯著增加。此外，免疫染色也支持我們的研究結果。在人類GBM中，VEGFA、MMP-9和MMP2水平與膠質(zhì)瘤的進展相關，并可由腫瘤細胞和MDSCs分泌。我們還進行了ELISA檢測，發(fā)現(xiàn)BATF2上調(diào)顯著降低了膠質(zhì)瘤組織中VEGFA、MMP2和MMP-9的水平(VEGFA: p< 0.001;MMP2: p < 0.01;MMP-9: p < 0.01)， U251-BATF2腫瘤中MMP-9染色減少。此外，酶譜結果顯示，BATF2組MMP2和MMP-9活性降低。這些數(shù)據(jù)共同表明，BATF2抑制膠質(zhì)瘤進展和Mo-MDSCs浸潤。 圖2 BATF2抑制單核細胞來源的MDSCs向腫瘤微環(huán)境的募集。A. 對注射15天后GL261-Ctrl和GL261-BATF2皮下腫瘤中BMDMs的流式分析和統(tǒng)計(n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p < 0.001)。B. 注射15天后U251-Ctrl和U251-BATF2組 GR-1+ CD11b+MDSCs和Ly-6C+ GR-1+ Mo-MDSCs/MDSCs 的流式分析。C. U251-Ctrl和U251-BATF2注射15天后CD11b+ Gr-1+MDSCs的統(tǒng)計(n =3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。D. U251-Ctrl和U251-BATF2注射15天后Gr-1+Ly-6C+Mo-MDSCs/CD11b+Gr1+MDSCs的統(tǒng)計(n=3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。E. 注射15天后U87-sh-NC、U87-sh-554和U87-sh-1068中CD11b+Gr-1+MDSCs和Gr-1+Ly-6C+Mo-MDSCs/ CD11b+Gr-1+MDSCs的流式分析。F. 注射15天后U87sh-NC、U87-sh-554和U87-sh-1068的CD11b+Gr-1+MDSCs的統(tǒng)計(n=3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。G. 注射15天后U87sh-NC、U87-sh-554和U87-sh-1068的Gr-1+Ly-6C+Mo-MDSCs/CD11b+Gr-1+MDSCs統(tǒng)計(n=3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。H. U251-Ctrl和U251-BATF2顱內(nèi)腫瘤Gr-1(綠色)、CD11b(紅色)、DAPI(藍色)免疫熒光染色的典型圖像。白色箭頭表示MDSCs�；鶞食�，50μm。I. ELISA檢測U251-Ctrl和U251-BATF2顱內(nèi)腫瘤中MMP-9、MMP2、VEGF (n=3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。J. U251-Ctrl和U251-BATF2顱內(nèi)腫瘤MMP-9(綠色)和DAPI(藍色)免疫熒光染色的典型圖像�；鶞食撸�50μm。K. U251-Ctrl和U251-BATF2腫瘤的酶譜分析。 三、 過表達BATF2細胞系的EVs在體外抑制MDSCs趨化 腫瘤來源EVs在腫瘤細胞與微環(huán)境之間的通信中起著關鍵作用。因此，我們假設BATF2抑制MDSCs與EVs有關。為了解決這個問題，我們從U251-Ctrl和U251-BATF2細胞系中分離了EVs。透射電鏡(TEM)顯示，U251-Ctrl和U251-BATF2細胞中腫瘤源EVs的大小分布和形態(tài)相似。此外，從腫瘤細胞上清中提取的EVs的NTA分析也顯示了U251-Ctrl和U251-BATF2細胞的大小分布。NTA分析也證實了來自胎牛血清的EVs的顆粒數(shù)。western blotting檢測U251-Ctrl、U251-BATF2、U87-NC和U87-sh-BATF2上清液中EVs標記物CD63、CD9、TSG101、GAPDH和BATF2的表達。這些數(shù)據(jù)表明，從U251-BATF2細胞中提取的EVs的BATF2蛋白水平高于從U251-Ctrl細胞中提取的EVs。此外，與sh-NC相比，sh-BATF2細胞系釋放的EVs中BATF2含量降低。為了進一步提供BATF2 - EVs抑制MDSCs趨化作用的體外證據(jù)，我們從攜帶GL-261的BALB/c裸小鼠中分離脾MDSCs，并從板孔底部過表達或下調(diào)BATF2的細胞中接種EVs，并與新鮮分離的脾MDSCs在上室共同孵育16小時。通過計數(shù)通過膜侵入的MDSCs數(shù)量，我們發(fā)現(xiàn)與BATF2- EVs共培養(yǎng)時，與ctrl - EVs組相比，底部的MDSCs數(shù)量明顯減少。相反，BATF2下調(diào)的細胞系(U87sh-554和U87-sh-1068)的EVs促進了MDSCs體外趨化。用Exocounter檢測EVs的表面蛋白。用金偶聯(lián)的BATF2抗體孵育的GBM來源EVs，然后用TEM掃描。結果顯示，EV表面存在BATF2蛋白，可以標記。我們使用Exo-counter平臺計算了U251-BATF2荷瘤小鼠血漿中BATF2+EVs的數(shù)量。我們觀察到，當BATF2在U251細胞中過表達時，隨著時間的推移，注射U251BATF2的小鼠血漿和骨髓中檢測到BATF2+EVs。這些數(shù)據(jù)表明，當BATF2在腫瘤中過表達時，體內(nèi)荷瘤小鼠血漿和骨髓中的BATF2+EV濃度可能上調(diào)。綜上所述，我們的結果表明，BATF2過表達細胞的EVs有效地抑制了MDSCs的募集。 圖3. 過表達batf2細胞系的ev在體外抑制MDSCs趨化。A. 用掃描透射電鏡分析，得到U251-Ctrl和U251-BATF2上清液中EVs的圖像。比例尺，100nm。B. 典型的U251-Ctrl和U251BATF2來源EVs樣品的NTA結果。C. western blotting檢測U251-Ctrl、U251-BATF2、U87-sh-NC、U87-sh-BATF2腫瘤細胞來源的EVs和腫瘤細胞中BATF2、TSG101、CD9、CD63和GAPDH的蛋白水平。D. 腫瘤來源EVs激活并招募MDSCs的Matrigel侵襲實驗。E. 與U251、U251- ctrl、U251- batf2腫瘤來源EVs共培養(yǎng)后的侵襲MDSCs細胞的代表圖像及統(tǒng)計。比例尺，200 μm (n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。F. 與U87-sh-NC、U87-sh-554、U87-sh-1068腫瘤來源EVs共培養(yǎng)后侵襲的MDSCs細胞的代表性圖像及統(tǒng)計。比例尺，200 μm (n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。G. GBM患者血漿EVs經(jīng)一抗batf2和金偶聯(lián)二抗染色后的透射電鏡觀察。箭頭表示BATF2 EV染色陽性。比例尺，100nm。H. Exo-Counter檢測u251 -BATF2小鼠0、7、14、21天血漿和骨髓中BATF2+EVs (n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。 四、 在顱內(nèi)腫瘤中，BATF2抑制SDF-1α的表達和cxcr4陽性的MDSCs浸潤 接下來，我們用ELISA檢測腫瘤中MDSCs相關的趨化因子(SDF-1α， MCP-1, M-CSF, GM-CSF和GCSF)。數(shù)據(jù)顯示，SDF-1α水平在顱內(nèi)U251-BATF2 腫瘤顯著降低 (p < 0.001) 。 然而，GM-CSF、MCP-1、M-CSF和G-CSF的局部表達沒有變化。特別是，BATF2上調(diào)抑制了在顱內(nèi)腫瘤細胞注射后7、14和21d期間SDF-1α的分泌。 此外，免疫組化染色證實了BATF2與SDF-1α水平呈負相關。為了進一步證實SDF-1α豐度的減少，我們還用膠質(zhì)瘤特異性標記SV40Tag和SDF-1α共同染色顱內(nèi)腫瘤組織。結果表明，過表達BATF2可減弱SDF-1α在腫瘤細胞周圍的定位。由于CXCR4是SDF-1α的主要受體，我們發(fā)現(xiàn)BATF2過表達主要抑制CXCR4+MDSCs的募集(p< 0.01)，但不抑制CXCR7+MDSCs的募集(不顯著)。免疫熒光共染色證實，在U251-BATF2腫瘤中存在少量的CXCR4+MDSCs，而在U251-Ctrl和U251-BATF2腫瘤中觀察到的CXCR7+MDSCs很少。為了證實BATF2- EVs對SDF-1α是否有抑制作用，我們在U251腫瘤建立7 d后，每3 d皮下注射U251- ctrl和U251- batf2上清EVs。我們注意到注射來自U251- batf2上清液的EVs顯著抑制了U251的生長(p< 0.001)。ELISA結果顯示，注射BATF2- EVs后腫瘤組織中SDF-1α水平顯著降低。據(jù)報道，HIF-1α通路可增加SDF-1α的表達。我們發(fā)現(xiàn)，在d7和d21之間的U251腫瘤進展過程中，HIF-1α的表達被激活，而在BATF2組中，在所有三個不同階段HIF-1α的表達都被降低。為了證明BATF2- EVs在SDF-1α減少中的作用，共聚焦顯微鏡證實了U251細胞對體外EVs的攝取。Western blotting和ELISA結果顯示，在常氧條件下，攝取BATF2- EVs對細胞SDF-1α的表達只有輕微的影響，而在缺氧條件下，BATF2- EVs處理明顯抑制了HIF-1α和SDF-1α的表達。補充PX478阻斷HIF-1α通路，防止BATF2或BATF2- EVs誘導的SDF-1α抑制。此外，ELISA和qPCR數(shù)據(jù)均證實，缺氧條件下，BATF2- EVs處理抑制了SDF-1α的表達。先前的研究表明SDF-1α是一種分泌蛋白。然而，尚不清楚SDF-1α是否存在于EVs中。因此，我們用非離子表面活性劑Triton X-100處理EVs，隨后的ELISA數(shù)據(jù)顯示，Triton X-100處理導致EVs水平上調(diào)1.5倍，而SDF-1α在BATF2- EVs共處理組顯著下調(diào)。western blotting和ELISA檢測證實，BATF2抑制U251細胞內(nèi)源性HIF-1α和SDF-1α。用金偶聯(lián)抗SDF-1α抗體標記EVs細胞膜后，TEM掃描檢測到SDF-1α。此外，Nano-FCM分析顯示SDF-1α+ EVs在U251-Ctrl細胞中的百分比(32.2%)，而在U251-BATF2細胞中較少(14.2%)(p< 0.05)。這些數(shù)據(jù)表明，SDF-1α水平在BATF2- EVs中降低。綜上所述，這些結果表明，batf2誘導的Mo-MDSCs招募抑制可能與SDF-1α有關。 圖4. 在顱內(nèi)腫瘤中，BATF2抑制SDF-1α的表達和cxcr4陽性的MDSCs浸潤。A. ELISA檢測U251-Ctrl和U251-BATF2組織中mdscs相關細胞因子(n =3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p < 0.001)。B. ELISA檢測U251-Ctrl和U251-BATF2腫瘤7、14、21天SDF-1α (n =3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。C. U251-Ctrl和U251-BATF2顱內(nèi)腫瘤連續(xù)切片上的BATF2和SDF-1α代表性免疫組化圖像。比例尺，100 μm。D. U251-Ctrl和U251-BATF2顱內(nèi)腫瘤中SDF-1α(綠色)、SV40 largeT(紅色)和DAPI(藍色)免疫熒光染色的代表性圖像。比例尺，25μm。E. 流式細胞分析從腫瘤中分離的CD11b+Gr1+MDSCs中CXCR4和CXCR7表達細胞的百分比。F. U251腫瘤注射U251-Ctrl和U251- batf2來源EVs四次后的代表圖像，采用ELISA檢測皮下腫瘤體積和SDF-1α (n =3個獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p < 0.001)。G. Western blot檢測U251腫瘤進展7、14和21天內(nèi)HIF-1α和SDF-1α。將PKH67標記的EVs加入phalloidin染色的U251細胞，western blot檢測HIF-1α和SDF-1α。比例尺，20μm。I. ELISA和qPCR檢測用Ctrl-EVs和BATF2-EVs處理的U251腫瘤中SDF-1α (n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p < 0.001)。J. ELISA檢測缺氧條件下加入和不加入1% Triton X-100的SDF-1α (n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。K. Nano-FCM分析和統(tǒng)計SDF-1α在ctrl -EVs和batf2 -EVs中的表達(n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。 五、 通過阻斷CXCR4信號通路，增加的MDSCs募集和batf2下調(diào)的腫瘤生長被逆轉 圖5. 通過阻斷CXCR4信號通路，batf2下調(diào)的MDSCs招募增加和腫瘤生長被逆轉。A. DMSO和AMD3100處理U87-sh-NC, U87-sh-554, U87-sh-1068注射小鼠的腫瘤圖像。B. DMSO和AMD3100處理的U87-sh-NC、U87sh-554、U87-sh-1068注射小鼠的腫瘤體積(n= 6， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。C. DMSO和AMD3100處理的U87-sh-NC、U87-sh-554、U87-sh-1068注射小鼠的腫瘤重量(n= 6， *p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。D. 流式分析U87-sh-NC、U87-sh-554和U87-sh-1068注射DMSO和AMD3100處理的腫瘤中CD11b+Gr1+ MDSCs。E. U87-sh-NC、U87sh-554和U87-sh-1068注射DMSO和AMD3100處理的腫瘤中CD11b+Gr1+MDSCs的統(tǒng)計(n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。F. 經(jīng)DMSO和AMD3100處理的U87-sh-NC、U87-sh-554和U87sh-1068中Gr-1(紅色)、CD11b(綠色)和DAPI(藍色)免疫熒光染色的代表性圖像。比例尺，25μm。G. ELISA檢測DMSO和AMD3100注射U87-sh-NC、U87-sh554、U87-sh-1068中MMP-9、VEGF、MMP2 (n= 3，獨立實驗，*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001)。 有興趣的話可以自己找這篇文獻具體看，或者私聊我要文獻資料，有理解得不對的地方，歡迎專業(yè)人士指正，一起交流~ 參考文獻： [1]Zhang, X; Liu, Y; Dai, L; et al.BATF2 prevents glioblastoma multiforme progression by inhibiting recruitment of myeloid-derived suppressor cells.[J].Oncogene.2021,40(8):1516-1530 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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[考研] 070300化學求調(diào)劑292分 +3 | 打烊eee 2026-03-07 | 3/150 |
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[考研] 材料專碩323求調(diào)劑 +5 | 李白26 2026-03-07 | 5/250 |
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[考研] 材料調(diào)劑 +10 | ounce. 2026-03-04 | 12/600 |
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[考研]
 材料工程調(diào)劑
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[考研] 085602高分子方向求調(diào)劑 +7 | tlgudy 2026-03-04 | 7/350 |
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[考博] 2026申博自薦 六級440電催化方向 +4 | 櫻落成影花成雙 2026-03-05 | 4/200 |
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[考研] 材料調(diào)劑 +4 | L9370 2026-03-05 | 4/200 |
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[考研] 一志愿西交化工專碩288專業(yè)課93求調(diào)劑 +6 | 好運好運接接 2026-03-04 | 6/300 |
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[考研] 0856材料工程，初試313調(diào)劑 +7 | 賣個關子吧 2026-03-03 | 7/350 |
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[考研] 085602化學工程350，調(diào)劑，有沒有211的 +5 | 利好利好. 2026-03-02 | 9/450 |
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[考研] 289求調(diào)劑 +7 | BrightLL 2026-03-02 | 9/450 |
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[考研] 化學0703求調(diào)劑 學碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
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