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海韻楠馨新蟲 (小有名氣)
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[求助]
DNS試劑測定α-淀粉酶抑制劑活性
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大家好，本人想測定某種物質(zhì)對α-淀粉酶的抑制作用。采用的是DNS法測定產(chǎn)物糖的方法。 我是自己提取天然產(chǎn)物，然后買淀粉酶，測定天然產(chǎn)物對淀粉酶的抑制作用。 根據(jù)文獻(xiàn)的步驟修改：精確吸取 0. 1mL的樣品 和 0. 1mL 5U/mL的α-淀粉酶溶液（用濃度與樣品與對照品區(qū)分不開），充分混勻，在 37℃下反應(yīng)10 min，然后加入0.1mL 1%可溶性淀粉液，在 37 ℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng) 5 min。再加入 0.2mL DNS 顯色劑，在沸水浴中反應(yīng) 3 min，之后立即用流動自來水冷卻 (終止反應(yīng))，用PBS稀釋10倍在 540 nm 波長下測定吸收度，記為 OD。 樣品用2%DMSO*PBS配置、1%可溶性淀粉液及酶液都是用PBS配置的。3,5-二硝基水楊酸(DNS)溶液從試劑公司購買。 但是根據(jù)這個步驟做出來，樣品組（樣品+α-淀粉酶溶液），空白對照組（用2%DMSO*PBS代替樣品，其他同上），陰性組（用PBS代替酶，其他與樣品/空白組一致）煮沸6分鐘后，紅棕色顏色很深，PBS稀釋減去陰性對照OD后，樣品濃度梯度小時，樣品組OD值與空白組OD值幾乎差不多，樣品吸光度參差不齊，無趨勢，有幾次做還會比空白組高。濃度梯度大時，有效果趨勢。 求大神幫忙，我是試了好多還不出滿意結(jié)果，希望各位大神提供幫助，謝謝！@lifeliuyan |
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