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LS-Cui新蟲 (初入文壇)
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RPA檢測技術(shù)干貨分享——你想知道的那些事（二）
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上個星期分享了關(guān)于核酸擴(kuò)增檢測中的一些試劑污染的注意事項(xiàng)，這次來繼續(xù)談?wù)動嘘P(guān)污染的第二個問題——擴(kuò)增產(chǎn)物污染。 造成核酸擴(kuò)增的主要污染源就是擴(kuò)增產(chǎn)物污染。通常，核酸經(jīng)過擴(kuò)增后，擴(kuò)增產(chǎn)物的拷貝數(shù)會非常大，一般為1013拷貝/ml，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于檢測數(shù)個拷貝的極限。因此，極微量的擴(kuò)增產(chǎn)物，就可以造成假陽性。為了解決這個問題，一些大家都常見的，公開信息可查詢到的注意事項(xiàng)，在這里也就不再贅述。下面主要來談?wù)勗谝酝鶎?shí)驗(yàn)過程中的具體心得和體會。 1.分區(qū)！分區(qū)！分區(qū)！ 重要的事情說三遍，通常在較規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室，都是有標(biāo)準(zhǔn)的四間房來分區(qū)，即試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物檢測區(qū)，并且有相應(yīng)的空氣系統(tǒng)來防止四個區(qū)之間的空氣的流動。但對于一般的實(shí)驗(yàn)室來說，都不具備這種條件，但是最基本要求也要在物理上實(shí)現(xiàn)至少兩個分區(qū)，即試劑配制區(qū)和擴(kuò)增區(qū)，如果需要開蓋檢測，則最好在另外一個區(qū)域進(jìn)行。 2.開蓋后要特別注意 如果是要開蓋檢測，那就要特別注意，吸取擴(kuò)增液體的移液器要專用，一定不能夠再拿來去配制試劑，在這點(diǎn)上我們需要特別強(qiáng)調(diào)。開蓋之后的手套、實(shí)驗(yàn)服等防護(hù)用品，也要專用，不要再穿戴同一套去做前面的試劑配制。 如果是不開蓋檢測（如實(shí)時熒光檢測），則應(yīng)將擴(kuò)增后的產(chǎn)物用一次性手套收起來，把手套口扎緊，防止擴(kuò)增的液體漏出。 3.擴(kuò)增產(chǎn)物的處理 這一點(diǎn)容易被實(shí)驗(yàn)人員所忽視，很多時候?qū)嶒?yàn)做完了，就隨手扔進(jìn)垃圾桶里，這樣可能會有一個潛在風(fēng)險(xiǎn)，如果發(fā)生泄漏或是其他原因，可能會沾到一些介質(zhì)上，被帶到試劑中，產(chǎn)生假陽性。部分實(shí)驗(yàn)人員稍不注意，戴著手套到處走，一旦沾到手套上，則會產(chǎn)生很嚴(yán)重的污染后果。 4.及時清理 實(shí)驗(yàn)完成后，最重要也是特別容易被忽視的，就是實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的清理工作。大部分實(shí)驗(yàn)室都是多人使用，偶爾發(fā)生實(shí)驗(yàn)人員清理不及時，被其他實(shí)驗(yàn)員無意間將擴(kuò)增產(chǎn)物帶到試劑配制區(qū)，污染了試劑，這種情況在污染原因排查時將十分困難。養(yǎng)成良好習(xí)慣，實(shí)驗(yàn)完成及時清理，也是防止污染的一個重要的因素。 除上述注意事項(xiàng)外，定期對實(shí)驗(yàn)中常接觸位置用酒精進(jìn)行擦洗，如門把手、冰箱門把手等處，可有效規(guī)避由于沒及時更換手套而帶來的潛在污染風(fēng)險(xiǎn)。 |
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