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| 【有獎(jiǎng)交流】積極回復(fù)本帖子，參與交流，就有機(jī)會(huì)分得作者 野山椒 的 19 個(gè)金幣 | |||
野山椒鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
畢赤酵母組成型表達(dá)外源蛋白
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| 用畢赤酵母GS115表達(dá)外源蛋白，為組成型表達(dá)，大概在96h左右OD漲到了300左右，還有繼續(xù)生長(zhǎng)的趨勢(shì)，但是取上清檢測(cè)酶活和蛋白質(zhì)含量，和搖瓶是一樣的，基本上相當(dāng)于只長(zhǎng)菌不表達(dá)，有什么可能的原因？有沒(méi)有哪位大神遇到過(guò)類(lèi)似的情況，交流一下，謝謝！ |
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木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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2樓2021-03-17 16:46:46
野山椒
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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不好意思，新手  我先挑取GS115單菌落到Y(jié)PD上再接種到BMGY培養(yǎng)基上，長(zhǎng)到一定濃度后按照接種量10%接種到發(fā)酵罐中，1.2L發(fā)酵罐，700毫升裝液量，發(fā)酵培養(yǎng)基為BSM，初始pH控制在5，溶氧控制在20-50，初始攪拌速度300rpm，前期較高溶氧，OD漲到200多的時(shí)候溶氧控制在30左右，組成型表達(dá)，所以一直補(bǔ)加甘油，后期通過(guò)補(bǔ)加甘油速率和攪拌轉(zhuǎn)速控制溶氧，最后OD漲到了400左右，但是檢測(cè)上清蛋白含量和酶活都很低，和搖瓶差不多 所有很奇怪，實(shí)在想不出哪出了問(wèn)題 |
3樓2021-03-17 17:13:04
4樓2021-04-26 17:18:31
Glorious47
新蟲(chóng) (小有名氣)
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5樓2021-05-18 13:38:40
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