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構(gòu)建過表達(dá)載體，基因CDS大片段缺失 已有2人參與
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大家好，我最近想構(gòu)建一個(gè)基因的過表達(dá)載體。從CDS中PCR該基因（3100bp)，條帶單一，大小正確，回收的基因片段測(cè)通，序列正確。但是我用同源重組的方式，將基因片段連接到慢病毒載體上，轉(zhuǎn)化后酶切驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)插入片段只有1000bp左右，測(cè)序也發(fā)現(xiàn)中間有2000多bp 的缺失。后面想到可能發(fā)生了細(xì)菌重組，從原來(lái)的DH5a感受態(tài)改為用Stbl3和Stable感受態(tài)，但是酶切結(jié)果顯示插入片段還是只有不到1000bp。后來(lái)直接把膠回的基因片段連到T載體上，用Stbl3和Stable感受態(tài)轉(zhuǎn)化，依然發(fā)現(xiàn)插入片段大范圍缺失。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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木元雨
木蟲 (職業(yè)作家)
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2樓2021-02-01 00:49:00
kangaroo0513
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3樓2021-02-01 08:00:52
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4樓2021-02-03 16:33:51
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