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小小書蟲飛新蟲 (小有名氣)
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核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中如何防范氣溶膠污染 已有4人參與
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科研和臨床檢驗(yàn)場(chǎng)所PCR分子實(shí)驗(yàn)使用頻率較高，PCR實(shí)驗(yàn)怕出問題了，當(dāng)PCR出現(xiàn)假陽性的時(shí)候，我們常常會(huì)考慮是不是引物、試劑、Mix、模板、水等發(fā)生了污染，然后逐一排查，有時(shí)還是找不到原因，耗時(shí)耗力。 那么這些試劑和儀器到底為什么會(huì)被污染了呢？ 其實(shí)有很大因素是核酸氣溶膠污染。 1、核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)需注意核酸氣溶膠污染 核酸檢驗(yàn)人都知道在核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)樣本的制備、擴(kuò)增過程中都會(huì)產(chǎn)生各種污染，比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、克隆質(zhì)粒污染、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染，氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點(diǎn)分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系，在空氣與液體面摩擦?xí)r，比如在核酸提取制備模板時(shí)，反復(fù)吹吸/混勻震蕩反應(yīng)液，以及PCR體系配液時(shí)充分震蕩反應(yīng)管，開蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)非常重要而被忽視的污染源。 DNA/RNA氣溶膠污染的問題，很嚴(yán)重，廣泛分布在樣本容器、實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面，試劑溶液中、儀器表面、內(nèi)管附著等等，極其微量的氣溶膠污染即可造成假陽性的結(jié)果，進(jìn)而可能引起整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)室的污染，嚴(yán)重的甚至要關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)工作，甚至耽誤疫情防控工作的開展。 2、實(shí)驗(yàn)室為何會(huì)出現(xiàn)氣溶膠？ 在核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)過程中，高速運(yùn)轉(zhuǎn)離心時(shí)未蓋緊試管蓋； 手工提取核酸時(shí)劇烈地?fù)u動(dòng)反應(yīng)管； 短時(shí)間處理大量的樣本核酸提取實(shí)驗(yàn)； PCR擴(kuò)增完成后開蓋； 吸樣時(shí)及移液器的反復(fù)吸樣； 處理血液樣本時(shí)，標(biāo)本暴漏在實(shí)驗(yàn)室空氣中。 以上舉例部分的這些行為都會(huì)使空氣與液體表面摩擦，產(chǎn)生核酸氣溶膠， 這些核酸小液滴還會(huì)落到實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、PCR儀、移液槍、吸頭、盒子、檢測(cè)人員衣服、頭發(fā)、門把手等等地方，如果我們不注意，這些核酸氣溶膠就會(huì)日積月累地積聚，這樣做檢測(cè)實(shí)驗(yàn)就特別出現(xiàn)問題比如PCR假陽性或者像報(bào)道中的造成檢測(cè)人員的感染。大面積核酸氣溶膠污染非常難以清除，若不采取清理與預(yù)防措施，污染會(huì)更加嚴(yán)重，長(zhǎng)期釋放污染核酸，終會(huì)不僅導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室停工也會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)人員的健康問題，所以對(duì)于核酸氣溶膠污染一定要給予重視。 3、如何避免產(chǎn)生氣溶膠污染呢？ 第一：自我防護(hù)是關(guān)鍵，相對(duì)于一線的醫(yī)生，檢測(cè)人員的防護(hù)服、口罩、防護(hù)鏡等一個(gè)也不能少；《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南》中就指出病毒抗原檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應(yīng)當(dāng)在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室的個(gè)人防護(hù)。 第二：每次檢測(cè)實(shí)驗(yàn)前后，都要使用專業(yè)的核酸氣溶膠污染清潔劑，對(duì)檢測(cè)臺(tái)面、核酸提取儀、PCR儀、手持移液器、離心機(jī)、振蕩器、空氣、門把手、地面、墻壁等位置進(jìn)行徹底清楚殘核酸留氣溶膠和潛在污染源，保證檢測(cè)樣本的準(zhǔn)確性和檢測(cè)人員的安全性。 第三：加強(qiáng)氣溶膠污染的監(jiān)測(cè)工作。通過專業(yè)監(jiān)測(cè)試劑盒對(duì)醫(yī)療場(chǎng)所和檢測(cè)場(chǎng)所都進(jìn)行定期監(jiān)控，做好防護(hù)，一旦發(fā)現(xiàn)醫(yī)療場(chǎng)所檢測(cè)出陽性樣本，應(yīng)及時(shí)暫定場(chǎng)所的使用，對(duì)過消毒、氣溶膠清除等措施，盡可能防止病毒通過場(chǎng)所間接擴(kuò)散；據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆�？珊�48000拷貝，因而由其造成的污染是一個(gè)非常重要而被忽視的污染源。氣溶膠污染廣泛分布在樣本容器、實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面，試劑溶液中、儀器表面、內(nèi)管附著等等，極其微量的氣溶膠污染即可造成檢測(cè)樣本假陽性的結(jié)果，進(jìn)而可能引起整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)室的污染，嚴(yán)重的甚至要關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室，嚴(yán)重影響疫情的診斷和防治工作，所以說污染監(jiān)測(cè)刻不容緩。 除采取上述措施之外，新冠核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)該使用無菌濾芯吸頭、無菌離心管等耗材，盡量減少實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)的意外因素，減少核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生的氣溶膠、液體飛濺等造成的實(shí)驗(yàn)儀器、移液器等污染，而影響結(jié)果的判讀。如有因操作失誤或意外引起的實(shí)驗(yàn)室生物安全，還需參考《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南》中相關(guān)措施進(jìn)行處理： （一）新型冠狀病毒毒株或其他潛在感染性材料污染生物安全柜的操作臺(tái)造成局限污染：使用有效氯含量為0.55%消毒液，消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時(shí)內(nèi)使用。此后內(nèi)容中有效氯含量參照此濃度。 （二）含病毒培養(yǎng)器皿碎裂或傾覆造成實(shí)驗(yàn)室污染：保持實(shí)驗(yàn)室空間密閉，避免污染物擴(kuò)散，使用0.55%有效氯消毒液的毛巾覆蓋污染區(qū)。必要時(shí)(大量溢撒時(shí))可用過氧乙酸加熱熏蒸實(shí)驗(yàn)室，劑量為2g/m3，熏蒸過夜；或20g/L過氧乙酸消毒液用氣溶膠噴霧器噴霧，用量8ml/m3，作用1～2小時(shí)；必要時(shí)或用高錳酸鉀-甲醛熏蒸：高錳酸鉀8g/m3，放入耐熱耐腐蝕容器（陶罐或玻璃容器），后加入甲醛（40%）10ml/m3，熏蒸4小時(shí)以上。熏蒸時(shí)室內(nèi)濕度60%-80%。 （三）清理污染物嚴(yán)格遵循活病毒生物安全操作要求，采用壓力蒸汽滅菌處理，并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室換氣等，防止次生危害。（轉(zhuǎn)自先達(dá)基因-gendx.cn） |
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樓主，想問個(gè)問題，PCR擴(kuò)增時(shí)總是連陰性對(duì)照都是陽性的結(jié)果，但水，引物，模板都是沒問題的，問題就是MIX，普通藍(lán)色的mix總是有假陽性（換了新的也不行），但換了做熒光定量的mix結(jié)果就好著，這是啥原因呢？求指教！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2021-01-14 21:06:26
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
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4樓2021-01-16 04:20:14
LXZ062043
新蟲 (初入文壇)
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5樓2021-06-13 10:33:00
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