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求助！做多肽的抑菌實驗用PB會析出 已有1人參與
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應化本科生，不是學微生物的，只是導師要求做抑菌實驗，都是靠實驗室里前幾屆學生摸索出來的方法。 說下方法： ①多肽用蒸餾水配制出不同濃度； ②活化斜面的大腸桿菌后，用3ml的30mmol/l的 pb（十二水磷酸氫二鈉 + 二水合磷酸二氫鈉）把斜面的菌沖下來； ③稀釋出濁度ok的菌液進行比濁（已通過預實驗確定了濁度）； ④將不同濃度的多肽水溶液（200微升）+菌液（200微升）混合均勻，37.5℃下反應1h； ⑤后面就是梯度稀釋和平板涂布。 問題來了，第④步混合好之后，多肽是沒析出的，但是反應完后很明顯地析出了，應該是不溶于pb的問題。這個多肽在以前就嘗試用pb配，經過超聲和加熱都是不溶的，加了三氟乙醇再超聲加熱好像也不行，加了甲醇析出更厲害了。多肽能溶于蒸餾水，這次只是抱著僥幸心理試一下能不能做抑菌，就在反應完析出了。 想問下稀釋涂布平板的抑菌實驗，萬一多肽能溶于生理鹽水的話，能用生理鹽水代替pb做嗎？生理鹽水和pb對大腸桿菌的滲透壓等方面有影響嗎？它倆做出來的空白組菌落數(shù)，有區(qū)別嗎？ 配制多肽溶液的時候，可以加入六氟異丙醇（hfip）之后再用原本的方法做抑菌嗎，會不會在pb里不析出了？ 如果用生理鹽水代替或者六氟異丙醇增溶的方法不行，還有其他方法做多肽的抑菌實驗嗎？ 有看到外文文獻用液體培養(yǎng)基，但我看得一頭霧水。如果可以的話，麻煩附上方法的一些資料，例如步驟、參考文獻等等。 非常感謝大佬們的解答�。�！  |
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鄭先能1992
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2樓2021-01-14 10:19:58
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