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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


已領(lǐng)完
結(jié)晶紫染色生物膜
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最近課題遇到了問題,我們發(fā)現(xiàn)了一株假交替單胞菌,老師讓我檢測一下產(chǎn)不產(chǎn)生生物膜,我用金黃色葡萄球菌做對照,用96孔板,結(jié)晶紫染色,但是每次實(shí)驗(yàn)都沒有結(jié)果。

我的方法是搖菌液,稀釋,加入96孔板,培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h以后液體移去,PBS.清洗兩遍,95%的乙醇固定5min,1%結(jié)晶紫染色5min,滅菌蒸餾水清洗3次,干燥后用酶標(biāo)儀測570nm的OD值,請問是不是方法不對?大家怎么檢測產(chǎn)不產(chǎn)生生物膜的

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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
26樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:17:22
菌液培養(yǎng)后是怎么稀釋的?用培養(yǎng)基稀釋還是?
96孔板培養(yǎng)后有看到菌液渾濁嗎?
我的做法是將用PBS(pH7.3)將各孔沖洗3次,以洗去雜質(zhì)和未黏附的菌體細(xì)胞;各管中已黏附的菌體用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min, ...

你好,可以加一下好友討論一下嗎?

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28樓2020-11-15 09:19:32
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
27樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:20:11
我是用EP管做的,所以是2ml體系,用96孔板測的話就是200ul體系,96孔板靜置培養(yǎng)時(shí)間不一定非得是24h,可以看看培養(yǎng)更長時(shí)間

用的培養(yǎng)基稀釋,可以嗎?

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30樓2020-11-17 08:46:00
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琴小糖

銀蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
引用回帖:
30樓: Originally posted by 張瑤0729 at 2020-11-17 08:46:00
用的培養(yǎng)基稀釋,可以嗎?
...

用培養(yǎng)基稀釋沒問題的
31樓2020-11-17 11:18:53
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琴小糖

銀蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
引用回帖:
38樓: Originally posted by 張瑤0729 at 2020-11-19 17:34:49
你好,我按照你的辦法,得出結(jié)果,金黃色葡萄球菌的OD值≤ODc值,是不產(chǎn)生生物膜吧?所以并不是所有的金黃色葡萄球菌都會(huì)產(chǎn)生生物膜?
...

金黃色葡萄球菌我沒怎么研究,我做的是日溝維腸桿菌,是具有產(chǎn)膜能力的,沒有用陽性對照,就用培養(yǎng)基不接菌做陰性對照,96孔板培養(yǎng)的時(shí)候最好包一下,有點(diǎn)容易干,影響也挺大的
40樓2020-11-20 12:00:34
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


2樓2020-10-31 13:43:36
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biosci

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
對照金葡菌產(chǎn)膜了嗎

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23樓2020-11-01 07:20:57
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
23樓: Originally posted by biosci at 2020-11-01 07:20:57
對照金葡菌產(chǎn)膜了嗎

沒有,所以應(yīng)怎么辦呢?步驟是不是哪里不行?

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24樓2020-11-03 08:52:00
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
23樓: Originally posted by biosci at 2020-11-01 07:20:57
對照金葡菌產(chǎn)膜了嗎

沒有,是技術(shù)不對嗎?還是?

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25樓2020-11-08 11:10:04
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琴小糖

銀蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
菌液培養(yǎng)后是怎么稀釋的?用培養(yǎng)基稀釋還是?
96孔板培養(yǎng)后有看到菌液渾濁嗎?
我的做法是將用PBS(pH7.3)將各孔沖洗3次,以洗去雜質(zhì)和未黏附的菌體細(xì)胞;各管中已黏附的菌體用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min,棄去甲醇,晾干EP管(或直接通風(fēng)處干燥24h);用2mL 0.1%(m/v)的結(jié)晶紫水溶液染色,15 min后棄去結(jié)晶紫染液,用蒸餾水沖洗掉多余染料后再次風(fēng)干2h。著色于菌體的結(jié)晶紫染料用2mL 33%(v/v)的冰醋酸重新溶解,30 min后測定光密度值OD590。
臨界ODc值為空白孔平均值加上其3倍的標(biāo)準(zhǔn)差而得到的OD值,根據(jù)OD值可將菌株的生物膜形成能力分類如下:OD ≤ ODc(不形成生物膜菌株,(0)),ODc <OD≤ 2 ODc(弱生物膜形成菌株,(+)),2 ODc < OD≤ 4 ODc(中等生物膜形成菌株,(++)  ),OD > 4 ODc(強(qiáng)生物膜形成菌株,(+++))。
沖洗全程越輕柔越好。
26樓2020-11-13 16:17:22
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琴小糖

銀蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
我是用EP管做的,所以是2ml體系,用96孔板測的話就是200ul體系,96孔板靜置培養(yǎng)時(shí)間不一定非得是24h,可以看看培養(yǎng)更長時(shí)間
27樓2020-11-13 16:20:11
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


我用的培養(yǎng)基稀釋,可以嗎?

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29樓2020-11-17 08:45:39
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
31樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 11:18:53
用培養(yǎng)基稀釋沒問題的...

請問我買的1%的結(jié)晶紫,可以直接用水稀釋嗎?

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32樓2020-11-17 12:40:13
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琴小糖

銀蟲 (小有名氣)


引用回帖:
32樓: Originally posted by 張瑤0729 at 2020-11-17 12:40:13
請問我買的1%的結(jié)晶紫,可以直接用水稀釋嗎?
...

可以
33樓2020-11-17 13:09:31
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
27樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:20:11
我是用EP管做的,所以是2ml體系,用96孔板測的話就是200ul體系,96孔板靜置培養(yǎng)時(shí)間不一定非得是24h,可以看看培養(yǎng)更長時(shí)間

臨界ODc值我沒有怎么看懂,怎么加上3倍的標(biāo)準(zhǔn)差?

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34樓2020-11-17 13:22:03
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
26樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-13 16:17:22
菌液培養(yǎng)后是怎么稀釋的?用培養(yǎng)基稀釋還是?
96孔板培養(yǎng)后有看到菌液渾濁嗎?
我的做法是將用PBS(pH7.3)將各孔沖洗3次,以洗去雜質(zhì)和未黏附的菌體細(xì)胞;各管中已黏附的菌體用2ml 95%(v/v)的甲醇固定15 min, ...

在問您一個(gè)問題,培養(yǎng)時(shí)間是不是對他也有影響?

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35樓2020-11-17 15:10:02
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琴小糖

銀蟲 (小有名氣)


引用回帖:
35樓: Originally posted by 張瑤0729 at 2020-11-17 15:10:02
在問您一個(gè)問題,培養(yǎng)時(shí)間是不是對他也有影響?
...

有的

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36樓2020-11-17 16:23:30
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
36樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 16:23:30
有的...

臨界ODc值我沒有怎么看懂,怎么加上3倍的標(biāo)準(zhǔn)差?這個(gè)您可以在解釋一下嗎

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37樓2020-11-17 17:57:52
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


引用回帖:
36樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 16:23:30
有的...

你好,我按照你的辦法,得出結(jié)果,金黃色葡萄球菌的OD值≤ODc值,是不產(chǎn)生生物膜吧?所以并不是所有的金黃色葡萄球菌都會(huì)產(chǎn)生生物膜?

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38樓2020-11-19 17:34:49
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張瑤0729

新蟲 (正式寫手)


送紅花一朵
引用回帖:
36樓: Originally posted by 琴小糖 at 2020-11-17 16:23:30
有的...

不同的培養(yǎng)基對生物膜有影響嗎?

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39樓2020-11-19 17:38:42
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藥化荊棘鳥

新蟲 (小有名氣)



小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包,謝謝回帖
我也在做生物膜,但數(shù)值太大了,結(jié)晶紫用的0.1%,而且誤差挺大的

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41樓2021-08-30 18:54:26
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簡單回復(fù)
2020-10-31 13:44   回復(fù)  
張瑤0729(金幣+1): 謝謝參與
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2020-10-31 13:44   回復(fù)  
張瑤0729(金幣+1): 謝謝參與
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ro115樓
2020-10-31 13:45   回復(fù)  
張瑤0729(金幣+1): 謝謝參與
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2020-10-31 13:55   回復(fù)  
張瑤0729(金幣+1): 謝謝參與
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2020-10-31 13:55   回復(fù)  
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魔588樓
2020-10-31 13:57   回復(fù)  
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2020-10-31 14:14   回復(fù)  
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68041610樓
2020-10-31 14:28   回復(fù)  
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朝歌062012樓
2020-10-31 15:05   回復(fù)  
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m_inter13樓
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whiteheads14樓
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playman15樓
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fgmsyutong16樓
2020-10-31 15:39   回復(fù)  
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tzynew17樓
2020-10-31 15:39   回復(fù)  
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xqyqwy18樓
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szgllp040819樓
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jixiangbao20樓
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Hot_kid21樓
2020-10-31 19:14   回復(fù)  
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xiecj22樓
2020-10-31 19:25   回復(fù)  
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